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操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
产品属性:
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
紫外分光光度法 | 50管/24样 | BJ-01S10171 |
商品介绍:
测定意义:
糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代谢的关键酶,使糖原分子从非还原端逐个断开α-1,4-糖苷键移去葡萄糖基,释放1-磷酸葡萄糖,直至临近糖原分子α-1,6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。GP分为有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和无活性的糖原磷酸化酶b(GPb)两种形式。GPb在一定浓度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。
测定原理:
GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH,在340nm下测定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定浓度的腺苷酸(5,-AMP)时测定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)时测定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
注意事项:
①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
小鼠 CD2 基因全长ORF克隆
小鼠 FGL2 基因全长ORF克隆
小鼠 CRABP2 基因全长ORF克隆
小鼠 P53 基因全长ORF克隆
小鼠 MDM2 基因全长ORF克隆
小鼠 CSRP1 基因全长ORF克隆
小鼠 HPGD 基因全长ORF克隆
小鼠 KIT 基因全长ORF克隆
小鼠 LRRC4C 基因全长ORF克隆
小鼠 METAP2 基因全长ORF克隆
糖原磷酸化酶b测试盒50管/24样大鼠缝隙连接蛋白α1,43kDa(GJA1)免疫试剂盒进口、组装
大鼠封闭蛋白4(CLDN4)免疫试剂盒进口、分装
大鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫试剂盒现货供应
大鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)免疫试剂盒*直销
大鼠肺炎支原体(MP)抗体免疫试剂盒进口、组装
大鼠肺炎病毒抗体(PV-Ab)免疫试剂盒进口、分装
大鼠肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)免疫试剂盒现货供应
大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)免疫试剂盒*直销
大鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)免疫试剂盒进口、组装
大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)免疫试剂盒进口、分装
大鼠肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)免疫试剂盒现货供应