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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97418 |
商品属性:
名称 小梁网细胞 2.组织来源:眼球 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 人小梁网细胞分离自眼球组织;小梁网由角膜基质纤维、后界膜和角膜内皮向后扩展而成,覆盖在巩膜静脉窦的内侧。小梁网细胞在眼内压调节中起着关键作用;小梁网细胞内有特定的神经递质和神经肽受体,其中包括肾上腺素、乙酰和神经肽Y。青光眼是由于眼内压力升高而造成的一种不可逆致盲眼病,小梁网细胞的体外培养是青光眼病因学研究的重要手段之一。在小梁网细胞中,一长串的血管活性多肽和生长因子能够触发细胞内信号传导机制,小梁网细胞可合成不同类型的细胞外基质蛋白以及金属蛋白酶。形态学观察可见,刚从组织块长出的原代细胞,形态各异,多数呈星状或不规则形。细胞有胞突,核椭圆形,胞体肥大,胞浆丰富,且可见吞噬颗粒。随着细胞的增生及相互融合为单层,细胞的形态趋于一致。胞浆的色素颗粒及胞突消失,排列紧密呈类似上皮细胞的扁椭圆形或不规则形。胞体透亮,包膜清晰。 5.方法简介: ()实验室分离的人小梁网细胞采用组织贴块法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的人小梁网细胞经NSE(神经元特异性烯醇化酶)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H132 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态梭形、多角形 传代特性可传1-2代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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Mycoplasma genitalium生殖支原体探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CK15 细胞角蛋白15抗体 0.1ml
Citrus Tristeza Virus(CTV)柑橘衰退病毒RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-rabbit IgG/HRP 辣根过氧化物标记的小鼠抗兔IgG 规格: 0.1ml
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Rickettsia spp.立克次氏体通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周PANK2 泛酸激2抗体 规格: 0.2ml
Hanzalova Virus汉扎洛瓦病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Shigella tropina 志贺氏菌菌体蛋白抗体 规格: 1mlElongin B/TCEB2 转录延伸因子B2抗体 规格: 0.1ml
Fructus chebulae诃子染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周YAP1 原基因Yes相关蛋白1抗体 规格: 0.2mlFibrinogen gamma chain
Adenovirus(AV)腺病毒E型LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Goat Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的羊抗人IgG 规格: 0.1mlMRP8+MRP14 多药耐药相关蛋白8/9/14抗体 规格: 0.2ml
Ehrlichiae spp.艾利希体属(埃立克体属)通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周PCDHGA1 原钙粘蛋白γA1抗体 规格: 0.2mlIFITM1/CD225 干扰素诱导跨膜蛋白1抗体 0.1ml