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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96656 |
商品属性:
名称 G1 (发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞) 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述G1细胞属保藏,其特征特性尚未被公开。 生长培养基RPMI-1640+10% FBS+1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人 VIPR2 / VPAC2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 SLC27A4 / FATP4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 SMR3B 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 Niemann-Pick disease type C2 / NPC2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 Ephrin-A4 / EFNA4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 ENPEP / A
G1 (发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞)2000U 绿豆核酸 Mung Bean Nuclease -20℃保存 1.25-80 ng/mL ELISA Kit for Human Secreted frizzled-related protein 2
2 ug pRS316 pRS316 低温运输,-20℃保存 1.25-80 ng/mL 人分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)ELISA试剂盒
血液增菌培养基 Blood Enrichment Medium 250g
50次 液体样品RNAout Liquid Sample RNAOUT 4℃保存
5mL 雪旺生长因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人肌球蛋白轻链激(MYLK)ELISA试剂盒
无盐胰胨水 20支 0.312-20 ng/mL 人热休克因子1(HSF-1)ELISA试剂盒
1瓶 L5178YTK+/- clone(3.7.2C)株 L5178YTK+/- clone(3.7.2C) 低温运输和保存
2 ug pTrc99a pTrc99a 低温运输,-20℃保存 0.312-20 ng/mL 气单胞菌(Asp)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
1瓶 SH-SY5Y株 SH-SY5Y 低温运输和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Hexokinase-1
100g 9,10- 二甲基 -1,2 苯并蒽 DMBA(9,10-Dimethyl-1,2-Benzanthracene) 常温保存
250mL Triton Permeating Solution in TBS,10X Triton Permeating Solution in TBS,10X 常温保存 78-5000 pg/ml ELISA Kit for Human Heparin-binding growth factor 1
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。