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乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法

具体成交价以合同协议为准

2022-08-15上海市
型号
参数
品牌:其他品牌 货号:BJ-0161114-1
上海邦景实业有限公司

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产品简介
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72581
详细信息

商品介绍:

测定意义:

乙醛脱氢酶 (EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种,广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸,在酒精代谢中起主要作用。在人类和许多动物体内,线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化,所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注;同时,乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。

测定原理:

在fu酶Ⅰ存在的条件下,乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH,在340nm处的吸光值会增加,测定340nm处的吸光值变化,可计算得到乙醛脱氢酶的活性。

自备实验用品及仪器:

天平、离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

特别提醒:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。

产品名称

检测方法

规格

货号

乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒微量法

微量法

100管/96样

BJ-0161114-1

10.png 

测定步骤:

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。

3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。

5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。

注意事项:

待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。

一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。

标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。

抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

实验方法学:

一、肝素的配制:

市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液样本的收集:

全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。

1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。

2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐。

选择抗凝的注意点:

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后

优点如下:

1、快速简便:全程约50分钟,可测100例左右样本。

2、取样量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可测红细胞中的SOD,只需2ml静脉血可测白细胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右组织就可测组织匀浆、胞浆中的SOD,0.2g组织可测线粒体及微粒体中的SOD。

3、灵敏度高:IC50=0.05g/ml,是邻苯三酚法的18倍。

4、稳定性好:试剂盒2~8℃存放6个月有效。

5、再现性好:变异系数CV=1.7%。

6、回收试验: X =103.3%。

7、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。

8、测试面广:可测动物血液、组织、各种体液、灌流液等、各种培养细胞、细菌、植物组织、各种水产以及化妆品、保健品等,效果均佳。

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金属蛋白mei组织抑制因子-2抗体盐反硝化枝芽孢杆菌大鼠成纤维*培养基

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Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)试剂盒Anti-CSF3R Antibodyras癌基因家族Rab11蛋白

干因子(SCF)试剂盒Anti-CSK Antibody视黄结合蛋白4

S100钙结合蛋白A11(S100A11)试剂盒 Anti-CSNK1A1 Antibody胰岛再生因子ICRF

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