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　　【仪表网 仪表标准】根据国家标准化管理委员会国家标准制修订计划，由中国标准化研究院提出并归口的《苹果中根皮苷的检测方法 高效液相色谱法》(计划号：20205076-T-424)国家标准现已形成征求意见稿，按照《国家标准管理办法》的有关规定，现向社会各界公开征求意见。
 

　　根皮苷含量作为是公认的苹果质量评价的关键性质量指标，作为一项苹果的品质评价指标具有重要的意义。但是目前针对苹果质量标准当中，由于缺乏苹果中根皮苷的检测方法，在目前已经发布实施的国家标准GB/T 10651-2008 《鲜苹果》没有设置根皮苷含量这一重要的质量评价指标，而是设置了最简单的可溶性固形物含量等这一较为常见的质量指 标，不利于苹果行业的进一步健康发展。因此，这项通用基础性的检测方法标准的制定，将为今后所有苹果相关标准的制定奠定良好的基 础。
 

　　本标准规定了用高效液相色谱法测定苹果中根皮苷含量的原理、材料、仪器与设备、测定步骤、结果计算与表示、精密度和回收率、检验报告。
 

　　本标准规范性引用文件包括：GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法；GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法。
 

　　方法原理：
 

　　苹果试样用 90%乙醇提取等样品前处理方法，然后经 C18 色谱柱分离，二极管阵列检测器检测，色谱峰保留时间定性，外标法定量。
 

　　仪器和设备：
 

　　1、0.45 µm 微孔水相滤膜，0.45 µm 针筒式有机相过滤器。2、旋转蒸发仪。
 

　　分析步骤：
 

　　试样制备：
 

　　将苹果样品，用干净纱布轻轻将样品表面擦净，将其切碎，混合均匀，称取 20.00 g 样品(精确到0.001g)加入 90%乙醇水溶液 100 mL，6000 r/min，匀浆 3 min，再加入 300 mL90%乙醇水溶液转移至1L 圆底烧瓶中，放入梭形转子，轻轻摇晃使样品和溶剂混合均匀，调节磁力搅拌器使转子能够带动溶液搅拌，80℃加热回流 1h 后(保证回流速度达到 1 滴/s，如果未到达，适当提高 1~2℃)，冷却过滤，45℃旋蒸，旋蒸至 60 mL，转移至分液漏斗中，加 80 mL 乙酸乙酯萃取两次，(如有乳化现象，通过 4000 r/min，离心 2 min 进行破乳)合并两次的乙酸乙酯相于 250 mL 圆底烧瓶中，旋转蒸发至干，每次采用1.0 mL 色谱甲醇清洗圆底烧瓶 3 次，全部转移至 5 mL 容量瓶中，加色谱甲醇定容至刻度，过 0.45 µm针筒式有机相过滤器，即为试样液。
 

　　试样测定：
 

　　将试样液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，同时记录其峰面积，根据标准曲线计算出试样液中根皮苷的浓度，平行测定次数不少于三次。待测试样中根皮苷的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。
 

　　本方法线性范围为5 μg/mL ~ 1000 μg/mL。 检出限：以3倍基线噪音信号确定检出限: 6.85 ng/mL,定量限：以10倍基线噪音信号确定定量限22.83 ng/mL。苹果试样取样量为20 g，确定检出限为0.83μg/mL，定量限为2.78 μg/mL。
 

　　本标准适用于苹果中根皮苷定性和含量测定。