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　　【仪表网 行业标准】根据国家标准化管理委员会、民政部印发的《团体标准管理规定》及《中国计量测试学会团体标准管理办法》有关规定，经中国计量测试学会批准立项，由青岛星赛生物科技有限公司等单位牵头起草的《益生菌活菌计数及代谢活力检测拉曼光谱法》团体标准现已完成征求意见稿的编制，为保证标准的科学性、严谨性和适用性，现面向社会广泛公开征求意见。意见反馈邮箱：zhoupin@singlecellbiotech.com。
 

　　2001 年联合国粮食及农业组织和世界卫生组织(FAO/WHO)提出，当摄入足够数量时，对宿主产生健康益处的活性微生物称之为益生菌。国际益生菌和益生元科学协会(ISAPP)2021 年对发酵食品定义为：通过所需的微生物生长和食品成分的酶转化而制成的食品。其中特别指出，当发酵食品中含有确切的活益生菌时，才能标注“含有益生菌”，并认为改善食品营养、调节人体免疫和肠道菌群、含有影响肠道和机体功能的生物活性物质等，是其促进健康的潜在机制。近年来，随着益生菌概念的流行，益生菌的产品线已经从饮食补充剂扩展到临床治疗。对于益生菌，不同菌株的活细胞数是否符合标准是公众主要关心的问题。但是，由于国内益生菌行业长期缺乏产品标准规范，导致益生菌产品质量良莠不齐，许多商品的说明书上并未标注关于所含益生菌菌株的功效和产品中实际存在的活细胞数量(菌落形成单位[CFU/毫升])。因此，为规范愈发庞大的益生菌市场，避免益生菌产品市场规模不断扩大而出现的虚假夸大宣传等乱象，对商业益生菌产品进行包括快速活菌计数、原位活力测试在内的定性和定量评价的检测方法迫在眉睫。
 

　　然而，目前行业中广泛应用的方法有很大的局限性。对于益生菌产品的活菌计数、活性检测等质检工作存在检测周期长、成本昂贵、混合益生菌产品检测效果差等问题。为提高益生菌产品的质量检测能力，本标准提出了拉曼光谱检测方法，对益生菌产品的活细胞数和原位活力进行测定。该方法能够准确测定益生菌产品中的活菌数和活性指标。该方法的建立为今后丰富我国益生菌产品的质控工作打下了一个良好的基础，并为制定中国自己的益生菌标签法律法规以及检测方法提供可靠的数据保障。
 

　　本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本标准分为6个部分：范围、规范性引用文件、术语和定义、试剂或材料、仪器设备、检验要求和方法。
 

　　本文件规定了益生菌产品活菌计数及代谢活力的术语和定义、描述了益生菌活菌计数方法和代谢活力的拉曼光谱检测方法。
 

　　本文件适用于含益生菌产品的活菌计数及代谢活力检测。包括添加的植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、格氏乳杆菌、卷曲乳杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和嗜热链球菌等一种或多种菌种。
 

　　检测原理：
 

　　利用重水(D2O)同位素标记时，具有代谢活力的细胞会同化氘(D)并代替氢(H)进行合成代谢，使得细菌的脂类、蛋白质、DNA 等生物质被氘化，所产生新的 C-D 键可被拉曼光谱灵敏检测到，并且碳-氘(C-D)峰强度可反映细胞的代谢活力。基于细胞的代谢活力来进行活菌计数，即具有代谢活力的细胞为活细胞。CDR 为 C-D 键的峰值光谱强度除以 C-D 键和 C-H 键的峰值光谱强度之和，以量化 C-H键中 D 的替代程度，即碳-氘峰值占比；所述 C-D 键的光谱强度是指在拉曼位移波数范围(2040-2300)cm−1范围内的拉曼光谱强度；C-H 键的光谱强度是指在拉曼位移波数范围(2800-3100)cm−1范围内的拉曼光谱强度。
 

　　仪器设备：
 

　　1.显微拉曼光谱仪：光谱分辨率不低于5cm-1，拉曼位移波数范围至少包含400cm-1-3200 cm-1。需配备50倍物镜、100倍物镜。
 

　　2.恒温培养箱：温控范围包含36 ℃，波动<±1 ℃；
 

　　3.振荡重悬器：转速覆盖1000-2800r/min；
 

　　4.分析天平：感量0.1mg和0.01g；
 

　　5.离心机：最大转速不低于5000r/min，有2-8℃制冷功能；
 

　　6.显微镜：数值孔径(50倍物镜为0.5、100倍物镜为0.9)，视场数26.5；
 

　　7.真空进样装置(适用于自动化检测法)：真空度50mbar；
 

　　8.注射泵(适用于自动化检测法)：流速范围包含2μL/min；
 

　　本标准的建立不仅弥补了我国益生菌行业质控方法的空白，同时对益生菌活菌计数及活性检测的标准检测方法进行了补充，很好的解决了益生菌行业长期缺乏产品标准规范，导致益生菌产品质量良莠不齐的问题。