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H9细胞消化液操作说明

来源: 上海抚生实业有限公司

2024/3/29 11:47:38 87

操作说明:

1. 将H9全培养基取出并平衡至室温,取出包被过Matrix的培养皿/瓶,吸去包被液并加入适量全培养基,置于5% CO2的37℃恒温细胞培养箱中。

2. 吸走待传代细胞培养皿/瓶中的iPS全培养基,并且加入无钙镁的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA传代工作液使之全覆盖皿/瓶底。

4. 室温放置5 ~ 8 min或37℃恒温细胞培养箱中孵育3 ~ 5 min,显微镜下观察到大部分克隆边缘开始脱离皿/瓶底,克隆内部大部分细胞间出现间隙但尚未相互分离,肉眼观察到细胞集落变得不透明且发白,表明细胞消化时间理想。

5. 吸去传代工作液,即刻加入新鲜的H9全培养基,用移液器扇形吹打培养皿/瓶底,使皿/瓶底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀。

 注:吹吸的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数总共不超过10次为宜。吹打过度导致大量单细胞出现是造成细胞分化或死亡的重要原因。

  注:如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。

6. 显微镜下观察细胞呈4 ~ 20个细胞大小的团块,水平十字摇匀。

7. 将细胞置于5% CO2的37℃恒温培养箱培养。

8. 每天换液直至达到可以传代的标准。

注意事项:

培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质,请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部;这部分有害物质的浓度和危害性都较低,如有接触,立即用自来水冲洗即可。

 



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