饲料中的含氮物总称为粗蛋白质,它包括纯蛋白质和氨化物,饲料中的蛋白质进入家禽体内后,以氨基酸形式被吸收利用,用以保证畜禽体内蛋白质代谢的需要。根据畜禽不同的生理状态和生产能力搭配日粮中合理的蛋白质水平,对于保证畜禽健康生长。提高畜禽生产能力是十分必要的。已颁布的饲料工业国标中对于不同畜禽在不同生长期日粮中蛋白质的含量都作了明确规定。为了保证饲料产品中粗蛋白质的含量符合国标要求,快速、准确地测定饲料产品特别是饲料主要原料中蛋白质的含量是十分必要的。由浙江托普仪器有限公司生产的ZDDN-II型定氮仪可在20分钟内(从称样到得出测定结果)完成饲料样品中蛋白质的快速测定。
1方法及原理
1.1方法
强碱直接蒸馏法是一从凯氏定氮法基础上发展起来的,和凯氏定氮法有较好相关性的快速检测方法。
1.2原理
饲料样品中部分不稳态氮在强碱作用下,经蒸馏可以以氨的形式释放出来,当加碱量和蒸馏速度恒定时,释放的氨量和样品中氮的含量成比例。将所释放的氨冷却后由硼酸接收变为四硼酸氨,用标准酸滴定,以所消耗的标准酸体积用凯氏定氮公式计算出样品中不稳态氮的含量,用特定的回归方程确定出饲料粗蛋白的含量。
1.3优点
DD法由于所测的是不稳态氮,因而可以大大地缩短了定氮时间。在ZDDN-II型蛋白质测定仪上仅用20分钟就可以测定出样品中粗蛋白的含量,比常规凯氏定氮法快12倍,比在器上进行恺氏定氮快4一6倍。
该方法所用仪器设备、试剂和凯氏定氮基本相同,用户只要根据我们提供的测定条件,就可在该仪器上实现蛋白质的快速测定。
1.4缺点
该快速方法测定的样品中不稳态氮而不是全氮,它的测定结果的准确性*取决于测定条件及所用仪器精度。在本文中所述的快速方法及条件仅适用于ZDDN-II型定氮仪。
2仪器和试剂
2.1仪器
ZDDN-II型定氮仪分析天平:感量0.00019酸滴定管:2.5ml量筒:iooml、25ml烧杯2.2化学试剂40%氢氧化钠溶液10%氯化钡溶液2%硼酸溶液混合指示剂,标准酸溶液2.3样品猪配合饲料(仔猪、育肥猪):北京农业大学提供鸡配合饲料(生长鸡、产蛋鸡、肉鸡):国家饲料质检中心提供豆粕:中国农科院饲料研究所提供中国农科院畜牧研究所提供玉米:中国逐科院畜牧研究所提供菜籽饼:中国逐科院畜牧研究所提供鱼粉:国家水产质检中心提供。
3测定结果度
ZDDN-II型定氮仪在进行凯氏法测定蛋白质时,有较高的精度;回收率>“写、相对偏差<1%.因此仪器在进行DD法快速测定时,同样可以保证测定结果的准确性。我们试验用凯氏定氮法和快速测定法,对16种同样玉米样品,16种同样鱼粉样品,16种同样猪料样品,16种同样鸡料样品,16种同样菜籽饼样品,16种同样豆粕样品测定含氮量,相对偏差均在国标法规定的允许误差范围之内。
我们还任选每类样品中一个,复测定五次,所测结果变异系数均低于1%,实验结果说明由ZDDN-II型定氮仪进行饲料中粗蛋白的快速测定具有较好的精密度(见附表)。
4影响测定结果准确度和精密度的主要因素
快速法是在凯氏法基础上发展起来的。它的操作步骤、所用试剂、仪器设备和凯氏法基本相同,由于该方法测定的是样品中部分不稳态氮,样品中真实的含氮量是由在规定条件下所建立的该法和凯氏法的回归方程y一吸+bx确定,方程中y为样品的实际含氮量,x为快速法所测的含氮量。方程中的a.b值是在规定条件下用凯氏法及快速法对大量样品进行测定,经数理统计而确定的,它的值取决于y和x值。x值受下列因素影响。
4.1样品类别不同类别的样品所含的成份差异较大。实验证明,即使在*相同的工作条件下,不同类别的样品具有不同的回归方程y=a+bx.
4.2定氮装置的蒸汽量(即单位时l可内的蒸馏速度)定氮装置的蒸汽量决定了单位时间的蒸馏速度,蒸馏速度不同,单位时间内样品所释放的氨量也不同,x值也不同,致使a.b值也不相同,由于手工装置不能保证恒定的蒸馏速度,即使用同一厂家生产的同一型号玻璃器皿,组装的手工定氮装置,由于蒸汽发生器中的水量不能保持恒定,因此蒸汽量也不能恒定,单位时间内蒸馏量也不能恒定。在某一个手工定氮装置上所确立的回归方程,也就无法应用于同类的手工定氮装置。早在五十年代,国外就报导了用快速法测定奶制品中的含氮量,但由于手工定氮装置本身的局限性,致使该法一直未得到推广。直至八十年代,瑞典Tecator公司生产了性能较好的1030型定氮仪,才在该仪器上建立了小麦的快速测定程序,才使该法在该公司生产的1030型仪器上得到推广应用。
4.3蒸馏量快速法的测定结果和馏出液体积有关,样品所释放的氨量随馏出液体积增加而增大。实验证明,当其它测定条件一定时,馏出液体积变化大于5一loml,测定结果将变化1.2%一3%.手工定氮装置及部分半自动定氮装置,其馏出液的体积是靠操作人员掌握,接收瓶本身的刻度误差,操作人员的目视误差均可大于sml,因此用这些装置在应用快速测定方法时难以保证测定结果的准确性和重现性。
4.4加碱量及碱液浓度参加反应的氢氧化钠浓度影响到所释放的氨量。增多加碱量,将影响测定速度,同时也造成试剂的浪费;加碱量太少,影响测定结果准确度。根据定氮装置的工作条件,确定出合理的加碱量是十分重要的。隆达科技公司生产的ZDDN-II型定氮仪选择的碱量为:40%的氢氧化钠溶液6Oml.在这个加碱浓度下加碱量误差不大于士sml,不影响测定结果。
4.5样品的称样量样品量不同,所含的不稳态氮也不同,因此称样量应是一个固定值。
对于ZDDN-II型定氮仪:鸡、猪配合饲料的称样量为3.OOOg-3.040g之间;鱼粉、豆粕、菜籽饼的称样量为2.00鲍-2.02鲍之间;玉米的称样量为5.OOOg-5.080g之间,综上所述,要保证测定结果的准确性,在称样量、加碱量一定的前提下,要保证建立方程所用的定氮装置和实没样品所用的定氮装置有着相同的且恒定的蒸馏速度和馏出液体积。
5ZDDN-II型定氮仪的特点保证了快速法测定的准确性和重现性
由托普仪器公司生产的ZDDN-II型定氮仪,由于在仪器设计和组装调试上采用了特定方法,因此具有下列较突出优点:、s.i蒸馏速度恒定由于该义器有一套*的自动蒸馏装置,它的蒸汽发生器中的水量始终保持恒定,当外加电源电压变化为士io%时,每分钟蒸馏量的变化不大于o.sml,所有由隆达科技公司生产的该类仪器,在出厂前,蒸馏量均调试在一固定值,因此应用由隆达科技公司所提供的快速测定程序及回归方程可在该公司生产的所有BS-I型定氮仪上应用,实验证明,具有较好的准确性。
5.2可保证在6分钟内馏出液体积误差<5m1由于BS-B型定氮仪具有恒定蒸馏速度,在该仪器上又设置了定时精度为0.1秒的数显时间继电器,当蒸馏时间确定后,馏出液的体积一单位时间的蒸馏量x蒸馏时间。因此,仪器本身就保证了馏出液体积的恒定,避免了操作人员的目视误差及接收瓶的该度误差所引起的馏出液体积误差,保证了测定结果的准确性和重现性。
综上所述,ZDDN-II型定氮仪在凯氏法定氮时具有较高的度,在用快速法定氮时同样具有较好的度,应用该仪器快速测定饲料中粗蛋白的含量,不仅简单、快速、准确而且和同类仪器相比还具有节电,对环境污染少等优点,它可对饲料原料及产品进行及时测定,使饲料产品质量得到及时控制。