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    细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。

细胞冻存的具体操作步骤：

1、配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛血清的冻存培养液;

2、取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用 PBS 清洗。

3、去除 PBS，加入适量yi蛋白酶 (覆盖培养皿表面) 把单层生长的细胞消化下来;

4、离心 1000rpm，5min;

5、去除yi蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为 5×106/ml~1×107/ml;

6、将细胞分装入冻存管中，每管 1~1.5 ml;

7、在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

8、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。