PCR扩增完成后需要进行琼脂糖凝胶电泳检测,在条带单一无其他杂带的情况下,可以直接对产物进行纯化。提升PCR产物纯化效率要点汇总如下:
1.模板纯度,有较多蛋白或其他杂质时,会一定程度影响pcr效率;
2.模板量,过高的模板量反而会降低pcr效率特异性;
3.引物,引物的长度xu要再效率和特异性间获得优化,其次要控制引物gc含量;
4.聚合酶,要考虑酶的保真率和速度;
5.mg离子浓度,mg离子浓度过高会降低特异性,浓度过低会降低效率;
6.退火温度:退火温度低,效率会高,但特异性降低;退火温度高,效率降低,但特异性会提高,需优化。