济南免疫亲和柱的测定原理和操作流程
时间:2022-04-23 阅读:130
济南免疫亲和柱的操作流程:
①样品处理:参照各法,对样品进行处理。
②净化:
(1)柱子预处理:取出免疫亲和柱,恢复至室温,将上端塞子取出,打开下端堵头,将柱内保存液流掉至高于凝胶上界面3-5mm处,停止流液(或将免疫层析柱直接连接于20ml注射器下)。
(2)加样:加入处理好的样品液10ml,打开下端堵头,调节流速至1-2滴/秒,直至空气进入亲和柱中,弃去流出液。
(3)淋洗:液体*排净后,依次用PBS缓冲液10ml、蒸馏水10ml,淋洗,流速为1-2滴/秒,弃掉流出液,抽干。
(4)洗脱:加入色谱级溶液,调节流速为1滴/秒,缓慢洗脱,收集全部洗脱液,用色谱级溶液定容至1ml(即为净化后的样品)。
③检测
净化后样品可直接用HPLC(高效液相色谱法)、GC-MS(气相色谱-质谱联用仪)、ELISA(酶联免疫吸附法)等方法进行检测。