PCD-007 光化学柱后衍生器

            ——提高检测灵敏度和重复性的利器

成都摩尔科学仪器有限公司

目录

1 的危害 ........................................................................................................................ 1

2 的检测方法 ................................................................................................................ 1

3 检测所需试剂及耗材 ............................................................................................... 2

4 艾力析实验科技有限公司研制的光化学柱后衍生器 ................................................................ 3

4.1 仪器介绍 ........................................................................................................................... 3

4.2 产品特点 ........................................................................................................................... 4

4.3 产品参数 ........................................................................................................................... 4

4.4 安装使用 ........................................................................................................................... 4

4.5 常见故障及简易排除方法 ................................................................................................ 4

4.6 注意事项及日常维护 ....................................................................................................... 5

4.7 检测的解决方案 ............................................................................................ 5

4.7.1 营养米粉类婴幼儿辅食 ........................................................................................ 5

4.7.2 乳制品 ................................................................................................................... 7

4.7.3 粮油 ........................................................................................................................ 9

4.7.4 花生及其制品 ..................................................................................................... 11

4.7.5 饲料 ..................................................................................................................... 13

4.7.6 中药材 ................................................................................................................. 15

4.8 磺胺类药物的检测 .......................................................................................................... 17

4.9 其他应用 ......................................................................................................................... 18

1 的危害

是一组化学结构类似的二呋喃的衍生化合物，可以由曲霉菌黄曲霉、寄生曲霉、集峰曲霉和伪滞曲霉产生。常常存在于发生霉变的中药材、谷物、农作物、坚果、奶制品以及动物饲料中等相关的产品中。其中 B1、B2、G1、G2易污染多种农作物、食品、饲料及中药材。被世界卫生组织（WHO）的癌症研究结构（IARC）划定为 I 类致癌物，是一种毒性的物质，其毒性是的 10 倍，其中以 B1毒性zui大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。

2 的检测方法

是当前食品及药品中污染zui严重的真菌毒素之一。因此，GB/T 2761-2011严格规定了各类食品中的*，zui值是 0.5μg/kg,所建立的检测方法必须达到 0.05μg/kg 的zui低定量限才能满足*的检测。同时在 2015 版药典七大变化之一安全性控制项

目大幅提升中，明确规定并强制推行中药材中的*检测。对《中国药典》收载的柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等 14 味药材及其饮品品种项下增加“”检查项目，限度为“ B1不得超过 5μg/kg; B2、 G1、 G2总量不得超过10μg/kg”。目前，对食品和中药材中的检测方法主要有：薄层色谱法（TLC），酶联免疫吸附法（ELISA）,亲和层析法（AFTB1）、免疫亲和-液相色谱法（HPLC 法）及液相色谱-质谱联用法（LC-MS）。其中将免疫亲和柱与高效液相色谱法结合应用，由于其前处理方法简单、仪器使用成本相对较低、可异构体分离、分离灵敏度高、稳定性好等******性，近年来已经得到广泛的应用。由于 B1、G1采用液相色谱荧光检测直接检测时易发生猝灭而导致灵敏度较低，因此需要对其进行衍生后才能达到痕量检测的要求。现行的检测采用的衍生方法主要分为柱前衍生（TFA 柱前衍生）和柱后衍生法（光化学柱后衍生、溴和碘柱后衍生）。采用 TFA 柱前衍生法，虽然检测灵敏度高，但需要用到有毒有害试剂（三、正己烷），且操作较其他几种方法繁琐；溴和碘柱后衍生法，在

样品预处理上相对较简单，但检测时需配备传统的柱后衍生装置，同时需要手动品配制衍生液，而不同人手动配制的衍生液的浓度会存在差异，从而导致待测物质保留时间稳定性较差。而光化学柱后衍生法在操作上相对简单，样品经过处理后可直接进样分析，减少了有机试剂的接触；且有效提高检验灵敏度和重复性;此外光化学柱后衍生器较传统的柱后衍生装置成本低，且检测灵敏度较溴和碘柱后衍生法理想。

4.2 产品特点

（1）无需使用化学物质（节约成本的同时，也避免操作人员接触有毒化学物质）；

（2）较传统柱后衍生装置（化学衍生泵、混合器、温控装置）成本低；

（3）直接连接于色谱柱与荧光检测器之间，安装操作简单；

（4）外观设计精巧细致，节省实验室空间；

（5）******采用进口配件，******了产品的使用性能；

（6）采用 PHILIP 进口紫外灯光源，使用寿命长达 8000h；

（7）采用的支架和管线缠绕方式，******了反应效率；

（8）可与国内外各种品牌及型号的荧光检测器联用；

（9）无腐蚀性酸流经毛细管，增加 HPLC 仪器的寿命；

（10）可持续工作数千小时，用后无需冲洗步骤；

（11） B1、B2、G1、G2 的zui低检测限均小于 0.5 ppb；

（12）符合 AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05 ，中国台湾标准（食

字 0981800370 号公告）和欧盟药典 2.8.18 标准分析方法要求；

（13）符合中国国家标准和进出口检验标准及 2015 版中国药典要求（增订光化学衍生法）；

4.3 产品参数

设备尺寸：411mm×53mm×68mm（长×宽×高）

净重： kg

毛重： kg

管线有效长度：25m

出入端管线长度：≤500mm

紫外灯寿命：≥4000

工作电源：220V、50Hz

工作功率：11W

环境温度：0~45℃

环境要求：严禁浸水、淋水，内含易碎物质避免冲击及跌落。

4.4 安装使用

（1）将衍生器上的聚四氟乙烯管，用配套规格的的 PEEK 接头，一端连接色谱柱，一段连接检测器，无连接方向要求

（2） 启动 HPLC 恒流并且流量压力均稳定后，检测各连接器件有无漏液情况，确定无误通电并打开电源开关（正面绿色自锁开关），系统进入紫外灯管预热状态。此时紫外灯点亮并预热，大约 10min 光线稳定后即可正常衍生反应。

4.5 常见故障及简易排除方法

（1）仪器安装完毕后，务必开启高压泵经过 1~2min 恒压运行，用滤纸检查仪器前后连接件确定无漏液后再开启电源使用，漏液应及时清洁，避免流动相溶剂对设备的腐蚀。避免环境影响，缩短平衡时间。

（2）请匆自行拆开仪器或任意改变温度控制器的内部设置，普通用户对于复杂的系统参数设置不熟悉时尽量使用出厂默认值或仪器自动设定值，如有问题请及时与本公司联系。

（3）仪器通电衍生后，出峰变小或异常峰；灯管光照不足或烧坏，使用备用系统或返厂更换维修；上述问题您无法解决时，请与经销商或厂家联系。

4.6 注意事项及日常维护

（1）使用前请检查电源插座是否良好接地，若没有请用线接好背面保护地线！柱大量漏液时可能对电气有腐蚀作用，长期腐蚀可能引起漏电，造成事故损失，因此请确保仪器良好接地。

（2）应保持柱箱部件的清洁，不用时请切断电源。

（3）严禁非维修人员拆解仪器，内有紫外光线，请勿直视漏光部位。

（4）灯管为专用灯管，更换时请务必确认切断电源。

（5）仪器自然散热，工作中请******通风，勿覆盖影响散热。

4.7 检测的解决方案

4.7.1 营养米粉类婴幼儿辅食

婴幼儿正直身体发育时期，应该营养均衡搭配，提倡给婴幼儿吃大自然提供给人类的各种食物。而在这些食物中，婴幼儿米粉（称“婴幼儿配方谷粉”、“营养米粉”或“婴幼儿米糊”），是母乳或婴儿配方食品不能满足婴儿营养需要以及婴儿断奶期间时，为补充婴幼儿营养的非常重要的辅助食品。由于营养米粉以小米、大米为主要原料，而小米和大米若储藏不当，******容易受到的污染。据不******统计，2015 年以来，国家食药监总局共公布了 64 批次存在食品安全风险的婴幼儿辅食，其中等污染物超标达 15

批次。因此，企业和国家质检部门有必要加强对婴幼儿辅食中霉菌毒素的检测与监管，保障婴幼儿食品的安全。

针对婴幼儿营养米粉中 B1 的检测，青岛艾力析实验科技有限公司为您提供了整套解决方案。满足我国婴幼儿食品中 B1(GB2761-2011)的 0.5μg／kg 的要求。

（1）色谱条件

色谱柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)

流动相：甲醇—水 （55/45，v/v）

柱温：25℃

流速：0.8mL/min

进样量：20μL

检测器：荧光检测器

检测波长：EX（激发波长）=360nm,EM（发射波长）=420nm

进样前2min开启光化学衍生池电源

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）

（2）样品处理

 提取

 ******称取 25.000g 样品于 500mL 的具塞玻璃容量瓶中，加入 125mL 甲醇-水(体积比为 70∶30)溶液；

 在高速匀质机上匀质 2～3min；

 取 30mL 左右匀质后的样液以 4000r／min 离心 5min；

 取上层清液 10mL 加入 30mL 水稀释，摇匀后过玻璃纤维滤纸过滤，滤液备用。

 SPE 柱净化

 回温解冻：提前办小时将免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；

 安装：将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上；

 上样：将提取的样品滤液全部转移到 10mL 玻璃注射器中，调节固相萃取装置上的压力控制阀，控制样品溶液以 1 滴/s 的速度通过免疫亲和柱，直至 2~3mL 空气通过柱体，弃去流出液；

 淋洗：向玻璃注射器内加入 10mL 水淋洗免疫亲和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有 2~3mL 空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；

 洗脱：******加入2.0mL流动相至注射器内，以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,于涡旋混合器上振荡1min，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

（3）样品测定

HPLC 直接进样，经 C18 色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出 B1 的浓度；图 3 为婴幼儿营养米粉中 B1 样品检测及加标样品检测叠加谱图。

（1）色谱条件

色谱柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)

流动相：甲醇—乙腈—水 （25/20/55，v/v）

柱温：30℃

流速：1.0 mL/min

进样量：20μL

检测器：荧光检测器

检测波长：EX（激发波长）=355nm,EM（发射波长）=430nm

进样前2min开启光化学衍生池电源

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）

（2）样品处理

 提取

 ******称取 2.0000g 奶粉样品，置于 50mL 的离心管中。将 20mL 已预热到 50℃的水加入到奶粉中，边加边振摇至奶粉******溶解；

 在涡旋混合器上振荡 2min 混合均匀；

 将奶粉乳浊液冷却至室温后，于 10000r/min、在-5℃下离心 10min；

 取 30mL 左右匀质后的样液以 4000r／min 离心 5min；

 将样品溶液用玻璃纤维滤纸过滤，滤液备用。

 SPE 柱净化

 回温解冻：提前办小时将免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；

 安装：将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上；

 上样：将提取的样品滤液全部转移到 10mL 玻璃注射器中，调节固相萃取装置上的压力控制阀，控制样品溶液以 1 滴/s 的速度通过免疫亲和柱，直至 2~3mL 空气通过柱体，弃去流出液；

 淋洗：向玻璃注射器内加入 10mL 水淋洗免疫亲和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有 2~3mL 空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；

 洗脱：******加入1.0mL流动相至注射器内，以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,用水定容到2mL。于涡旋混合器上振荡1min，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

（3）样品测定

HPLC 直接进样，经 C18 色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出 B1、B2、G1、G2、M1 和 M2 的浓度；图 4 为 6 种同时检测的色谱图。

（1）色谱条件

色谱柱： Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)

流动相：甲醇—水 （50/50，v/v）

柱温：30℃

流速：1.0 mL/min

进样量：20μL

检测器：荧光检测器

检测波长：EX（激发波长）=360nm,EM（发射波长）=440nm

进样前2min开启光化学衍生池电源

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）

（2）样品处理

 提取

 ******称取 25.000g 粮、油样品于 500mL 锥形瓶中，加入 5g 氯化钠、加入 125mL甲醇水(体积比为 70∶30)；

 在高速匀质机上匀 20mL 水稀释，摇匀后过玻璃纤维滤纸过滤，滤液备用。

 SPE 柱净化

 回温解冻：提前办小时将免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；

 安装：将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上；

 上样：将提取的样品滤液全部转移到 10mL 玻璃注射器中，调节固相萃取装置上的压力控制阀，控制样品溶液以 1 滴/s 的速度通过免疫亲和柱，直至 2~3mL 空气通过柱体，弃去流出液；

 淋洗：向玻璃注射器内加入 10mL 水淋洗免疫亲和柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有 2~3mL 空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；

 洗脱：******加入1.0mL甲醇至注射器内，以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,加入1.0mL纯水于洗脱液中，于涡旋混合器上振荡1min，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

（3）样品测定

HPLC 直接进样，经 C18 色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出 B1、B2、G1、G2的浓度；图 4 为各样品检测色谱图。

（1）色谱条件

色谱柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)

流动相：甲醇—水 （55/45，v/v）

柱温：25℃

流速：0.8mL/min

进样量：50μL

检测器：荧光检测器

检测波长：EX（激发波长）=360nm,EM（发射波长）=420nm

进样前2min开启光化学衍生池电源

光化学衍生化系统：光化学衍生器（连接于色谱柱后，然后通向荧光检测器）

（2）样品处理

 提取

 ******称取 25.000g 粉碎样品于 500mL 的锥形瓶中，加入 125mL 甲醇-水(体积比

为 70∶30)溶液；

 在高速匀质机上匀质 2～3min；

 取 30mL 左右匀质后的样液以 4000r／min 离心 10min；

 用槽纹滤纸过滤试样溶液于 50mL 量筒中；

 收集滤液 15mL，加入 30mL 二次去离子水，混匀，将稀释后的滤液用玻璃纤维滤纸再次过滤。

 SPE 柱净化

 回温解冻：提前办小时将免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻；

 安装：将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上；

 上样：将提取的样品滤液 15mL 转移到玻璃注射器中，调节固相萃取装置上的压力控制阀，控制样品溶液以 1 滴/s 的速度通过免疫亲和柱，直至 2~3mL 空气通过柱体，弃去流出液；

 淋洗：向玻璃注射器内加入 10mL 去离子水淋洗免疫亲和柱，流速位 1 滴/s~2滴/s，淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有 2~3mL 空气通过柱体，弃去全部的流出液，抽干小柱；

 洗脱：加入1.0mL甲醇至注射器内，以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1、B2、G1、G2洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,并加入1mL去离子水，于涡旋混合器上振荡1min，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。

（3）样品测定

HPLC 直接进样，经 C18 色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出 B1、B2、G1、G2的浓度；图 6 为花生粉样品添加 1.5μg/kg 水平的色谱图。

根据 GB/T 30955-2014 中饲料中的检测方法，青岛艾力析实验科技有限公司提供完整的解决方案。

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