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原理:
曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,产品仅用于科研Z后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加*同步。
SYBR定量PCR扩增荧光曲线图
PCR产物熔解曲线图
2.TaqMan探针法:
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成*同步。
参数规格:
产品名称:曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称:Aspergillus spp.
货号:CP914032
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
特点优势:
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对细菌种属及血清型的特异检测,特异性均达到。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除TIANDZ公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。
6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
使用方法:
一、样品采集:
1、食品样品:样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。
2、血液样品:用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL,注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管,立即混匀。
3、粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的 DN段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
6. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
荧光定量PCR实验步骤:
①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
以下是曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒的相关产品:
Yellow powderChamaechromone中文名:狼毒色原酮性状:Yellow powder纯度:98.0%
PowderLiquiritin apioside中文名:芹糖甘草苷性状:Powder纯度:%
PowderPierreione B中文名:性状:Powder纯度:98.0%
PowderAfzelechin中文名:阿夫儿茶精性状:Powder纯度:98.5%
Yellow powder5-Hydroxy-7-acetoxyflavone中文名:性状:Yellow powder纯度:97.0%
PowderAmpelopsin中文名:蛇葡萄素性状:Powder纯度:98.0%
Yellow powderQuercetin中文名:槲皮素性状:Yellow powder纯度:99.0%
Powder3,4'-Dihydroxy-3',5,7-trimethoxyflavan中文名:性状:Powder纯度:%
Powder5,7-Diacetoxyflavone中文名:性状:Powder纯度:%
Yellow powderWogonin中文名:汉黄芩素性状:Yellow powder纯度:98.0%
Brown powderAmaronol A中文名:性状:Brown powder纯度:98.5%
Yellow powder5-Acetoxy-7-hydroxyflavone中文名:性状:Yellow powder纯度:%
Cryst.5,7-Diacetoxy-8-methoxyflavone中文名:性状:Cryst.纯度:%
Yellow powder5-Hydroxy-7-acetoxy-8-methoxyflavone中文名:性状:Yellow powder纯度:%
PowderNaringenin中文名:柚皮素性状:Powder纯度:98.0%
Powder3,7-Di-O-acetylpinobanksin中文名:性状:Powder纯度:96.0%
Yellow powderApigenin中文名:芹菜素性状:Yellow powder纯度:99.0%
曲霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒Rifamycinsodiumsalt 利福霉素钠;利福霉素SV钠 规格:>98%
Octreotideacetate 醋酸奥曲肽 规格:>98%
(S)-(+)-2-Ami-butanol S(+)-2-氨基-1-丁醇 规格:>98%
trans-D-erythro-sphingosine D-鞘氨醇 规格:>98%
ribophytosphingosinehydrochloride 糖脂;植物鞘胺醇 规格:>98%
Omeprazole 奥美拉唑 规格:>98%
Omeprazole 奥美拉唑(标准品) 规格:>98%
Chlorzoxazone 氯唑沙宗 规格:>98%
Chlorzoxazone 氯唑沙宗(标准品) 规格:>98%
D-Glucosaminehydrochloride D-氨基葡萄糖盐酸盐 规格:>98%
D-Glucosaminehydrochloride 盐酸氨基葡萄糖(标准品) 规格:>98%
Droperidol 氟派利多,氟哌利多 规格:>98%
Droperidol 氟派利多,氟哌利多(标准品) 规格:>98%
6-Mercaptopurinemonohydrate 6-疏基嘌呤/6-巯基嘌呤(一水合物) 规格:>98%
Paracetamol(Acetaminofenpolvo) 扑热息痛/对乙酰氨基酚 规格:>98%