参数规格：

产品名称：番茄内标准Apx基因探针法PCR试剂盒
货号:CP96885
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

以下是番茄内标准Apx基因探针法PCR试剂盒公司正在热销的产品：
Goat LDH(L-Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit资源名称人心杆菌种属:Cardiobacteriumhominis分离基物:人血，比利时

Goat FSH(Follicle Stimulating Hormone) ELISA Kit资源名称脑膜炎奈瑟菌种属:Neisseria meningitidis分离基物:脑膜炎患者的脊髓液

Goat LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit资源名称白色链霉菌白色亚种种属:Streptomycesalbussubsp.albu安全等级:1

Goat ALB(Albumin) ELISA Kit资源名称Lentzeasp种属:Lentzeasp分离基物:泥

Goat SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit资源名称带小棒链霉菌种属:Streptomycesclavuligerus分离基物:土壤

Goat IL-6(Interleukin 6) ELISA Kit资源名称Streptomycesscabiei种属:Streptomycesscabiei分离基物:土壤

Goat IL-10(Interleukin 10) ELISA Kit资源名称肠沙门氏菌肠亚种鼠伤寒血清型种属:Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium提供形式:冻干物

Goat TNFα(Tumor Necrosis Factor Alpha) ELISA Kit资源名称黄短杆菌种属:Brevibacterium│flavum提供形式:斜面培养物

Goat HSP-70(Heat Shock Protein 70) ELISA Kit资源名称日沟维肠杆菌种属:Enterobacter│gergoviae提供形式:冻干物

Goat FG(Fibrinogen) ELISA Kit资源名称白地霉（斜面）种属:Geotrichum candidum提供形式:斜面培养物

Goat TGFB1 ELISA Kit资源名称嗜热毁丝霉种属:Myceliophthora thermophila提供形式:冻干物

Goat IL1B(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit资源名称假中间葡萄球菌种属:Staphylococcus│pseudintermedius提供形式:冻干物

Goat Interleukin 1α(IL-1α) ELISA Kit资源名称鲍氏志贺氏菌种属:Shigella bogdii提供形式:冻干物

Goat IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit资源名称汤卜逊沙门氏菌种属:Salmonella thompson提供形式:冻干物

Guinea pig ACE(Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit资源名称山夫顿堡沙门氏菌种属:Salmonella senftenberg提供形式:冻干物

Guinea pig ANP(Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit资源名称丙型副伤寒沙门氏菌种属:Salmonella paratyphi-C提供形式:冻干物

Guinea pig Bax(Bcl-2 Associated X Protein) ELISA Kit资源名称多主枝孢霉种属:Cladosporium herbarum提供形式:冻干物

Guinea pig Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2) ELISA Kit资源名称肠沙门氏菌肠亚种波那雷恩血清型种属:Salmonella enterica subsp. enterica serotype Bonariensis分离基物:进口冻白蛤肉

Guinea pig BDNF(Brain Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit资源名称左旋乳酸芽孢杆菌种属:Bacillus│laevolacticus分离基物:面粉

Guinea pig C3(Complement Component 3) ELISA Kit资源名称亮杆菌属种属:Leucobacter sp.分离基物:皮革厂附近受污染的土壤和水样
番茄内标准Apx基因探针法PCR试剂盒IL-1raGVPC平板(军团菌选择性平板)产品用途：GVPC平板用于环境水样及临床样本中军团菌的选择性培养分离。(ISO)。产品规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

IL12A中国蓝琼脂培养基平板产品用途：中国蓝琼脂培养基平板用于检测肠道细菌的弱选择培养基。产品规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

IL-13HE琼脂平板产品用途：用于肠道致病菌特别是沙门氏菌和志贺氏菌的选择性分离培养。规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

IL-5XLD琼脂培养基平板产品用途：XLD琼脂培养基平板用于革兰氏阴性肠杆菌特别是志贺氏菌和沙门氏菌的选择性分离培养。(GB、ISO、美国FDA、EP、USP)。产品规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

IFN-γ|IFNG|IFG|IFI|Type II Interferon四号琼脂平板产品用途：含亚碲酸钾，四号琼脂平板用于霍乱弧菌的选择性分离培养。产品规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

CTLA 8|CTLA8|IL 17|IL 17A|IL17|IL-17|IL17A|interleukin 17ATCBS琼脂培养基平板产品用途：TCBS琼脂培养基平板用于肠道致病性弧菌特别是霍乱弧菌和副溶血性弧菌的选择性分离培养。(GB、美国FDA、SN、ISO)。产品规格：20个/盒储存条件：2-8℃避光保存

cTn-ISC增菌液产品用途：SC增菌液用于沙门氏菌选择性增菌培养。(GB、SN、美国FDA、ISO、USP)产品规格：225ml/X10袋冷藏：2-8℃

FBP2|FBPase 2|fructose 1|6 bisphosphatase 2李氏增菌肉汤1产品用途：李氏增菌肉汤1用于李斯特氏菌的选择性增菌培养。(GB)产品规格：225ml/X10袋冷藏：2-8℃