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试析ELIS试剂盒实验内标物的挑选及满足条件

时间:2018-01-04      阅读:187

ELIS试剂盒将一个已知质量,样品中不含有杂质的纯物质,参加至待测样品溶液中,以此纯物质的量为规范,比照测定待测组分的含量,该纯物质称为内标物。
内标物需满意下列要求:能*溶解于样品中,且不与待测组分发作化学作用;峰位尽可能与待测组分的峰位接近,但能与待测组分*分隔(别离度R≥1.5)的纯物质。若得不到纯品,有必要预先测定其准确含量,且杂质峰不得干扰待测组分峰。
测定的成果较为准确,因为通过丈量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行核算的,因而在一定程度上消除了操作条件等的改变所引起的差错。内标法的缺陷是操作程序较为费事,每次剖析时内标物和试样都要准确称量,有时寻觅适宜的内标物也有困难。 外标法简洁,但进样量要求非常准确,要严厉控制在与规范物相同的操作条件下进行,不然形成剖析差错,得不到准确的丈量成果。
ELIS试剂盒内标法是结合了峰面积归一法和外标法的长处的一种办法,它在参加内标后,按峰面积归一法的剖析办法进行剖析,这就防止了因为进样的一致性及样品轻视效应导致的偶然差错,因而,它的剖析精密度也是比较高的,是气相色谱的一种比较抱负的定量剖析办法。它的缺点是前处理比较复杂,所花费的时间也比较长,一起有必要要有适宜的标样及内标物才干进行内标法定量剖析。关于内标法定量剖析来说,内标物的挑选是及其重要的。
它有必要满意如下的条件:
① 内标物与被剖析物质的物理化学性质要类似;
② 内标物应能*溶解于被测样品(或溶剂)中,且不与被测样品起化学反应;
③ 内标物的出峰方位应该与被剖析物质的出峰方位相近,且又不共溢出,意图是为了防止GC的不稳定性所形成的灵敏度的差异;
④ 挑选适宜的内标物参加量,使得内标物和被剖析物质二者峰面积的匹配性大于75%,以免因为它们处在不同响应值区域而导致的灵敏度偏差。
① 将已知量的内标样参加规范样品,制成混合标样,并制造一系列的已知浓度的作业标样。混合标样中标样与内标样的摩尔比不变。
② 注入色谱柱,以(标样峰面积/内标样峰面积)为响应值。
③ 依据响应值与作业标样浓度之间存在的线性关系,即W=f×A,制成规范曲线。
④ 将已知量的内标样参加不知道样品,注入色谱柱,得到欲测组分的响应值。
⑤ 依据已知的系数f,即可求出欲测组分的浓度。
ELIS试剂盒操作过程中样品和内标是混合在一起注入色谱柱的,因而只需混合溶液中被测组分与内标的量的比值稳定,上样体积的改变不会影响影响定量成果。
内标法抵消了上样体积,甚至活动相、检测器的影响,因而比外标法准确。

 

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