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ELISA试剂盒研究实验条件选择的重要性

时间:2018-01-04      阅读:126

ELISA试剂盒条件挑选有以下几种方式:
(1) 固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在运用前均可进行挑选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反响,调查其显色反响是否均一性,据此判明其吸附功能是否杰出。
(2) 包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,小鼠ELISA试剂盒时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一起,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于多数蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
(3) ELISA试剂盒酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采纳“方阵法"(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度)在正式实验体系里地滴定其作业浓度。

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