咱们选用两株克己的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml，操纵俭朴 ，重复性杰出，可用于IL-8的根底和临床研讨。在严峻感染病人的血清中、炎症部分渗出液中都可检测到高水平的IL-8。此外，近年来的研讨标明，IL-8可能与各种安排缺血后再灌注损害的发作有关，包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同惯例ELISA法。封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存，注意事项待检标本如为血清，应选用一次性容器，血液收集后赶快(6小时以内)别离血清。原理选用两株辨认不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其间一株(4D7)作为包被抗体，以辨认和结合待检标本中的IL-8，另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结兼并催化底物显色。试剂器件包含ELISA试剂盒供给包被抗体、酶标抗体、尺度品，底物(ABTS)、96孔ELISA板。Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化效果，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。
操作步骤
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml，参加96孔板，100μl/孔，放4℃，36小时。
2. 封闭：0.1％吐温PBS(Buffer A)冲刷96孔板三次，加3％BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃，1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲刷96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的规范品100μl/孔，放37℃，3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲刷96孔板五次，3％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，参加96孔板，100μl/孔，放37℃，1小时。
5. 显色：Buffer A冲刷96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)，0.2mg/ml，加3％H2O2，2μl/ml，参加96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
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