英文名称  Anti-phospho-ECT2 (Ser370)

中文名称  磷酸化上皮细胞癌转化蛋白2抗体

别    名  ECT2 (phospho S370); ECT2 (phospho Ser370); p-ECT2 (Ser370); ECT 2; ECT2; ECT-2; ECT2 protein; Epithelial cell transforming sequence 2; Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene; Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene protein; FLJ10461; MGC138291; Protein ECT2; ECT2_HUMAN; Epithelial cell-transforming sequence 2 oncogene.

浓    度  1mg/1ml    

规 格  0.1ml/200μg

抗体来源  Rabbit

克隆类型  polyclonal

交叉反应  Human

产品类型  一抗  磷酸化抗体

研究领域

性    状  Lyophilized or Liquid

免 疫 原  KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human ECT2 around the phosphorylation site of Ser370

亚    型  IgG

纯化方法  affinity purified by Protein A

储 存 液  Preservative: 15mM Sodium Azide, Constituents: 1% BSA, 0.01M PBS, pH 7.4

产品应用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IP=1:20-100  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  ICC=1:100-500  IF=1:100-500

抗体的荧光标记法：

（一）基本原理

赖氨酸残基的游离e-氨基可与FITC(其激发波长为492nm,发射光波长为525nm)共价结合。与FITC结合的抗体可用为特异性的探针,以测定细胞相应抗原的存在。FITC具有很高的量子产量(发射光与吸收光的比值,0.85)形成的偶联物的稳定性很好。

（二）仪器和试剂

1.待偶联抗体；

2.碳酸氢钠缓冲液；

3.叠氮钠；

4.庵氰酸荧光素；

5.电磁搅拌器。

抗体的制备过程：

1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。

2. 免疫动物：常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量时需要用到狗、绵羊、山羊等。

3. 免疫血清的收集：一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血，家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。

4. 免疫血清的纯化与鉴定：得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。

5. 免疫血清的保存：抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。

AQP9    水通道蛋白-9抗体

Annexin A3    膜粘连蛋白A3抗体

Annexin IV    膜粘连蛋白 A4抗体

APG8A    自噬相关蛋白8A抗体

phospho-Akt (Thr450)    磷酸化蛋白激酶B抗体

phospho-AMPK alpha-1 (Thr198)    磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体

phospho-Akt(Thr308)    磷酸化蛋白激酶B抗体

APOBEC3G    脱氧胞苷脱氨酶蛋白抗体

AKAP13    蛋白激酶锚定蛋白13抗体

AP1M2    AP-1μ2抗体

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1

大鼠纤维母细胞；1/EJ 1-1

黄胸鼠肺成纤维细胞；YCR

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；PC-12 [PC12]

黑化大家鼠肺成纤维细胞；NRm

大鼠肺细胞；WTRL1

仓鼠源细胞

二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞；CHO/dhFr-

中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆)；CHO-K1

叙利亚仓鼠肾细胞；BHK-21

中国仓鼠卵巢细胞；CHO

人APP-PS1(C410Y)双基因转染细胞株；7WCY1.0

人APP基因转染CHO细胞株；7WD10

人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株；7WML6.0

人APP-PS1双基因转染CHO细胞株；7WPS1

Anti-phospho-ECT2 (Ser370)抗体中国仓鼠卵巢细胞K1(亚系克隆)；CHO-K1

叙利亚仓鼠肾细胞；BHK-21

中国仓鼠卵巢细胞－二氢叶酸还原酶缺陷型；CHO/dhFr-

叙利亚仓鼠肾细胞；BHK-21

抗体分子标记技术：

（一）原理

当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。

（二）准备

1.试剂

经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体；0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5；无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5）；胺T反应终止缓冲液；

2.仪器

凝胶过滤柱；￥-记数器；玻璃纤维滤。

（三）操作要点

1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行；

2.如果氧化反应损伤蛋白质，可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m，并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年；

4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天）；

5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低；

6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。