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适用范围【参考值】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。
参数规格:
产品名称:百部PCR鉴定试剂盒规格
英文名称:Radix stemonae
货号:YSP8525
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
5-基-2-基吡啶 97% 沙拉沙星木槿提取物Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit
Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit
环氧氯烷 Standard for GC,≥99.6% (GC) 氯草定鸡脚参提取物Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit
Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
环氧氯烷 AR 苯并[e]芘儿茶提取物Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit
Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit
环氧氯烷 CP 3-氟-4-氰基苯酸酯粉防己提取物Human KLK5(Kallikrein-5) ELISA Kit
Human LN(Laminin) ELISA Kit
环氧氯烷 ≥99.5% (GC) 2,4,5-三基苯胺寄生提取物Human LEP(Leptin) ELISA Kit
Human Leptin R(Leptin receptor) ELISA Kit
环氧氯烷 分析标准品 嘧菌酯黄水茄提取物Human LIFR(Leukemia inhibitory factor receptor) ELISA Kit
Human LUM(Lumican) ELISA Kit
2,6-二基吡啶 98% 霉酚酸吗啉酯豆瓣菜提取物Human MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit
Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit
3,5-二基吡啶 98% 3,4,5-三氧基苯酸广玉兰提取物Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit
Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit
酰酸酯 99% 分散蓝 35珍珠母提取物Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit
Human MIA(Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit
酰酸酯 CP,98% 酰嘧磺隆红萝卜提取物Human MK(Midkine) ELISA Kit
Human MIP-1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit
百部PCR鉴定试剂盒规格aGT(Human angiotensinogen) ELISA Kit 人血管紧张素原射干苷 分析标准品,>98% 呋喃唑酮 98%Fusarium equiseti
aGT ELISA Kit 大鼠血管紧张素原鸢尾黄素 分析标准品,≥98%呋喃西林 分析标准品Fusarium graminearum
AGPA/PCA(Human anti-gastric parietal cell antibody) ELISA Kit 人抗胃壁细胞抗体鸢尾黄素 分析标准品,≥97% 呋喃西林 98%Fusarium moniliforme
Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins) ELISA Kit 人核仁形成区嗜银蛋白辣椒素 分析标准品,>98%硫酸铝,十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Fusarium nivale
a-Glu(Mouse Alpha-Glucosidase) ELISA Kit 小鼠α葡萄糖苷酶溴苯 CP,98.0%硫酸铝 99.99% metals basisFusarium oxysporum
a-Glu ELISA Kit 大鼠α葡萄糖苷酶溴苯 99.5%赫斯特荧光燃料,33258 98%Fusarium poae
AGEs(Mouse advanced glycation end products) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化终末产物溴苯 AR,99%赫斯特荧光燃料,33342 98%Fusarium solani
AGEs ELISA Kit 大鼠晚期糖基化终末产物溴苯 Standard for GC,>99.5%(GC)胞内钙荧光探针BAPTA, AM 95%Fusarium sporotricoides
AGAA(Human anti-golgi apparatus antibody) ELISA Kit 人抗高尔基体抗体3-溴酸 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基荧光素 90%Fusarium spp.
AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit 人抗麦胶蛋白/麦醇溶蛋白抗体1,8-二溴辛烷 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基荧光素酰酯1 mg/ml,溶剂:DMSOFusarium tricinctum
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论