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适用范围【参考值】
1.试剂盒有效性判定:
(1)阳性对照:有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。
(2)阴性对照:Ct值>38或无Ct值,线形为直线或轻微斜线,无指数增长期。
2.标本结果判定:
(1)阳性:标本检测结果Ct值≤35或有明显指数增长期。
(2)可疑:标本检测结果Ct值在35~38范围内。此时应对标本进行重复检测,如重复实验结果Ct值仍在35~38范围内,有明显指数增长期,则判定为阳性,否则为阴性。
(3)阴性:标本检测结果Ct值>38或无Ct值。
参数规格:
产品名称:黄柏染料法PCR鉴定试剂盒说明书
英文名称:Cortex phellodendri
货号:YSP8702
产品规格:50次
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
氯代正己烷 standard for GC, ≥99.5% (GC) 盐酸左布比卡因邻苯二酸二辛酯(DOP)Mouse S1PR2(Sphingosine 1-phosphate receptor 2) ELISA Kit
Mouse S1PR3(Sphingosine 1-phosphate receptor 3) ELISA Kit
氯代十二烷 98% 4-氮杂吲哚椰油酰胺基羟磺基甜菜碱Mouse Ncor2(Nuclear receptor corepressor 2) ELISA Kit
Mouse GDF11(Growth/differentiation factor 11) ELISA Kit
1-氯辛烷 99% Boc-5-氨基戊酸椰油酰胺基氧化胺Mouse Fabp5(Fatty acid-binding protein, epidermal) ELISA Kit
Mouse Ncor1(Nuclear receptor corepressor 1) ELISA Kit
1-硫代癸烷 96% 2-酰胺基噻唑水溶性硅油Mouse Defb1(Beta-defensin 1) ELISA Kit
Mouse Crabp2(Cellular retinoic acid-binding protein 2) ELISA Kit
1,10-癸二硫醇 96% 磷酸钾一水合物异构十醇聚氧烯醚1003Mouse Defb2(Beta-defensin 2) ELISA Kit
Mouse Lpl(Lipoprotein lipase) ELISA Kit
1,2-二溴烷 98% 耐晒猩红RC壬基酚聚氧烯醚NP-10Mouse Tac1(Protachykinin-1) ELISA Kit
Mouse Hmgb1(High mobility group protein B1) ELISA Kit
1,3-二溴烷 98% 九氟戊酸异构十三醇聚氧烯醚1307Mouse ADIPOR1(Adiponectin Receptor 1) ELISA Kit
Mouse Aph1a(Gamma-secretase subunit APH-1A) ELISA Kit
正十二硫醇 98% D-谷氨酸二酯盐酸盐十二烷基苯磺酸Mouse Reg3β(RegeneRating islet-derived protein 3-beta) ELISA Kit
Mouse Ahsp(Alpha-hemoglobin-stabilizing protein) ELISA Kit
1,4-二溴烷 98% 2-溴-5-氯苯酸酯椰子油脂肪酸Mouse MUC1(Mucin-1) ELISA Kit
Mouse Pde5a(cGMP-specific 3',5'-cyclic phosphodiesterase) ELISA Kit
1,6-二溴己烷 97% N,N-二异基酰胺溴酸东莨菪碱原粉Mouse Ghrh(Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit
Mouse Sfrp2(Secreted frizzled-related protein 2) ELISA Kit
黄柏染料法PCR鉴定试剂盒说明书 马来酸溴苯那敏异氏剂标准溶液 10μg/ml,u=5%(剧)肉浸液肉汤培养基293/hTLR5
氯硝柳胺a-硫丹标准溶液 100μg/ml,u=3%,基体:苯叠氮钠葡萄糖肉汤293/m
氯硝柳胺醇胺盐 a-硫丹标准溶液 10μg/ml,u=5%基紫叠氮钠肉汤293/mNOD2
茶碱酸β-硫丹标准溶液 100μg/ml,u=3%KF链球菌琼脂293/mTLR1
盐酸度洛西汀β-硫丹标准溶液 10μg/ml,u=5%CIN-1培养基基础293/mTLR2
2,3-二巯基磺酸钠(一水)硫丹 分析标准品,98%(剧)改良Y培养基293/mTLR3
羟茶碱硫磷标准溶液 100μg/ml,u=2%(剧)改良磷酸盐缓冲液PSB293/mTLR4
盐酸氯芬酯硫磷标准溶液 10μg/ml,u=3%(剧)营养肉汤(NB)293/mTLR5
茶苯海明酮中嘧硫磷标准溶液 100μg/ml,u=2%营养琼脂(NA)293/mTLR6
洛缌酮中嘧硫磷标准溶液 10μg/ml,u=2%改良番茄汁培养基293/mTLR9
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论