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细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
公司细胞现货供应，质量有保证、*、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 小鼠腓肠肌细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1418 |
商品介绍：
名称 小鼠腓肠肌细胞 2.组织来源：骨骼肌组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 小鼠腓肠肌细胞分离自小腿肌肉组织；腓肠肌位于小腿后面的皮下，是一个浅表的肌肉，当人体站立时，可以在小腿后面看到隆起肌肉的轮廓就是腓肠肌。腓肠肌为小腿后侧群浅组肌肉，有内、外二头，内侧头起自股骨内侧髁上的三角形隆起，外侧头起自股骨外侧髁的近侧端，在二头的深面各有一滑膜囊。腓肠肌的二肌腹增大，在腘窝下角彼此邻近，所成夹角多为25°～30°，此肌下行与比目鱼肌移行为跟腱，止于跟骨结节。腓肠肌的动脉发自腘动脉、静脉与动脉伴行，注入腘静脉或小隐静脉。腓肠肌的神经全部来自胫神经。包括内、外侧肌神经。腓肠肌在行走及站立时能提足跟向上，直立时，腓肠肌和比目鱼肌都参加强固膝关节，并调节小腿和足的位置。胫前皮肤缺损或深部窦道及瘢痕，可以切取腓肠肌内侧头及其皮面皮肤所形成的肌皮瓣向前旋转。腓肠肌还可影响足的纵弓，该肌瘫痪或时，足纵弓将加深。该肌由胫神经支配，股骨髁上骨折时，因腓肠肌收缩远侧端常自后移位。腓肠肌是胫骨和腓骨后面的一块肌肉。腓肠肌细胞属于骨骼肌细胞的一种，骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带（Ⅰ带）及暗带（A带）。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。 5.方法简介： ()实验室分离的小鼠腓肠肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的小鼠腓肠肌细胞经α-Sarcometric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 包被条件PLL（0.1mg/ml） 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M319 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传3-5代左右 消化液0.25% 培养条件气相：空气，95%；CO2，5% |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒 10次
纯化线粒体ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
细胞ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
组织ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
ATP生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒 50次
细ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
真/酵母ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
植物ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
食物污染ATP生物发光法定量检测试剂盒 50次
小鼠腓肠肌细胞叠氮钠葡萄糖肉汤 进口、国产Azide Dextrose Broth用于链球菌的增菌培养250兔过氧化物体增殖物激活受体β(PPARβ)免疫试剂盒现货供应
乙基紫叠氮钠肉汤 进口、国产Ethyl Violet Azide Broth用于链球菌的增菌培养250兔过氧化物体增殖物激活受体α(PPARA)免疫试剂盒*直销
KF链球菌琼脂 进口、国产KF Streptococcus Agar用于链球菌的选择性分离及计数（SN标准）100兔骨桥素(OPN)免疫试剂盒进口、组装
LIM培养基进口、国产LIM Medium用于链球菌的分离培养(Japan方法)250兔骨钙素/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫试剂盒进口、分装
BETA-SSA 琼脂进口、国产BETA-SSA Agar用于链球菌的选择性分离培养(ACUMEDIA方法)250兔骨保护素(OPG)免疫试剂盒现货供应
改良Y培养基 进口、国产Agar Y，Modified用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）250兔钩端螺旋体IgG(Lep IgG)免疫试剂盒*直销
改良盐缓冲液PSB 进口、国产Phosphate Saline Buffer,Modified用于小肠结肠炎耶尔森氏菌冷增菌培养 （GB标准）250兔干扰素诱导蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫试剂盒进口、组装
ITC 肉汤进口、国产ITC Broth用于分离培养耶尔森氏菌(ISO方法)250兔钙结合蛋白(CALB2)免疫试剂盒进口、分装
CIN-1I培养基基础 进口、国产Cepulodin Irgasan Novobiocin Agar用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）250兔儿茶胺(CA)免疫试剂盒现货供应
营养肉汤（NB）进口、国产Nutrient Broth一般细菌培养,转种,复壮,增菌等.也可用于消毒效果测定250兔多肽YY(PYY)免疫试剂盒*直销
