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使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
公司细胞现货供应,质量有保证、*、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供最新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称 | 小鼠胚胎成纤维细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1104 |
商品介绍:
名称 小鼠胚胎成纤维细胞 2.组织来源:胚胎组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠胚胎成纤维细胞分离自胚胎;成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞,能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子,故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性,且分泌效果优于外源添加的一些因子,而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境,故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。 5.方法简介: ()实验室分离的小鼠胚胎成纤维细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的小鼠胚胎成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M134 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传3-5代 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
50T 水痘带状疱疹病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 1.56-100 ng/mL 人DNA拓扑异构1(DNA topoisomerase 1)ELISA试剂盒
1 mg SB203580(p38 MAPK抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 6.25-400 ng/mL ELISA Kit for Mouse Tumor rejection antigen P815A
250mL Gelatin Veronal Buffer (G
小鼠胚胎成纤维细胞平板计数肉汤(PCB) 250g
HIG1/HIGD1A 缺氧诱导基因1蛋白抗体 规格: 0.2ml
T3 三碘甲狀素T3抗体 规格: 0.1ml
KLK3/Prostate Specific Antigen 激肽释放3/舒管素3抗体 0.2ml
CCDC40 卷曲螺旋结构域蛋白40抗体 规格: 0.2ml
UROD 尿卟啉原脱羧抗体 规格: 0.2ml
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 MOPS Buffer,0.5M,pH5.5 常温保存
、志贺氏菌检验培养基
300次 β-半乳糖苷检测试剂盒 β-galactosidase Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
2 ug pSP73 pSP73 低温运输,-20℃保存
液体大豆酪蛋白消化物培养基 SoybeanCasein Digest Medium 250g
100mg D- 果糖 -6- 二钠 D-Fructose -6-Phosphate -20℃保存