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冷冻细胞活化的方法

时间:2015-08-20      阅读:216

1、冷冻细胞之活化原则为快速解冻,以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害,导致细胞之死亡。 

2
、细胞活化后,约需数日,或继代一至二代,其细胞生长或特性表现才会恢复正常(例如产生单株抗体或是其它蛋白质)。 

3
、材料 37℃恒温水槽、新鲜培养基、无菌吸管/离心管/培养瓶、液氮或干冰容器

4、步骤: 

1)操作人员应戴防护面罩及手套,防止冷冻管可能爆裂之伤害。 

2)自液氮或干冰容器中取出冷冻管,检查盖子是否旋紧,由于热胀冷缩过程,此时盖子易松掉。

3)将新鲜培养基置于37℃水槽中回温,回温后喷以70%酒精并擦拭之,移入无菌操作台内。

4)取出冷冻管,立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,以70%酒精擦拭保存管外部,移入无菌操作台内。 

5)取出解冻之细胞悬浮液,缓缓加入有培养基之培养容器内(稀释比例为110115),混合均匀,放入CO2培养箱培养。取0.1ml解冻细胞悬浮液作存活测试。

6)解冻后是否立即去除冷冻保护剂(例如DMSOglycerol),依细胞种类而异,一般而言,大都不需要立即去除冷冻保护剂。惟若要立即去除,则将解冻之细胞悬浮液加入含有5-10ml培养基之离心管内,离心1000rpm5分钟,移去上清液,加入新鲜培养基,混合均匀,放入CO2培养箱培养。 

7)若不需立即去除冷冻保存剂,则在解冻培养后隔日更换培养基。 



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