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大肠埃希氏菌定义
大肠埃希氏菌是指能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培养液呈黄色,能产生β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide)使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的细菌。
检测重要性
《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750-2006中将大肠埃希氏菌列入检测项目中。并在解读《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006中阐述:“只有埃希氏大肠杆菌是粪源特异性的,是准确和专一的粪便污染指示”。
二、用途 :大肠埃希氏菌测定荧光观察使用方法:插上电源,将经过24小时培养后的EC-MUG管在灯下照射,如有蓝色荧光产生则为大肠埃希氏菌阳性管;
暗箱式:BOT-UVIIIA
一、技术参数:
1、电压:220v 50HZ
2、功率:8W*2
3、波长:366nm
4、滤光片:200X50 mm
5、辐照:30CM内强度约为1480μW/cm2
6、防紫外线观察窗:160*80mm
8、具有过流,过压保护装置
9、规格尺寸:385X340X330mm
10、重量5Kg
11、*的内部黑色涂层设计,观察更清晰。
三、注意事项:每次观察时,用一个没开封的EC-MUG管和被测的EC-MUG管在紫外光灯同时观察,如果被测的EC-MUG管产生荧光,在紫外光灯下与没开封的EC-MUG管比较,有明显的区别。每次测试完后将电源拔掉。
四、具体方法:取供试液10ml(相当于供试品1g、1ml),直接或处理后接种至适量(不少于100ml)的胆盐乳糖培养基中,培养18--24小时,必要时可延长至48小时.
取上述培养物0.2ml,接种至含5mlMUG培养基的试管内,培养,于5小时、24小时在366nm紫外线下观察,同时用未接种的MUG培养基作本底对照.若管内培养物呈现荧光,为MUG阳性,不呈现荧光,为MUG阴性.观察后,沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液,液面呈玫瑰红色,为靛基质阳性,呈试剂本色,为靛基持阴性.本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性.
如MUG阳性,靛基质阳性,判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性,靛基质阴性,判供试品未检出大肠埃希菌;如MUG阳性,靛基质阴性,或MUG阴性,靛基质阳性,则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红*琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上,培养18--24小时.
若平板上无菌落生长,或生长的菌落与表所列的菌落形态特征不符,判供试品未检出大肠埃希菌.若平板上生长的菌落与表所列的菌落形态特征相符或疑似,应进行分离,纯化,染色镜检和适宜的生化试验,确认是否为大肠埃希菌.
大肠菌形态特征
用曙红*培养基:呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色,菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心,圆形,稍凸起,边缘整齐,表面光滑,湿润,常有金属光泽