功能

　　•　二硫键还原反应器

　　•　HDX反应器

　　随着生物制药产品在市场上的快速增长，对蛋白质组学研究中更快速、更有效的结构阐明方法的需求越来越大。在这个工作流程中有一个小而关键的步骤，那就是二硫键的还原。传统的方法是使用化学方法来实现这一点。Antec开发了用于自动在线二硫化物键还原的ROXY反应器。

　　该方法是基于一个电势来触发还原反应，不使用还原性化学品。传统上，还原是使用化学品进行的，例如二硫苏糖醇(DTT)，需要在LC/MS分析之前去除。此外，也可以使用无硫醇还原剂，如TCEP(三(2-羧乙基)膦)。化学法样品制备是费力的，很难与在线LC/MS相结合。用质谱在线设置的电化学是干净的，不需要化学品，结果可以即时监测。

图1：ROXY EC系统配备了µ- prepcell2.0流通池，并与布鲁克SolariX 12T FT-ICR质量联用，进行准确的蛋白质MS和MS/MS分析

　　二硫键对HDX-MS来说是一个挑战，因为它们增加了蛋白质对酶解的稳定性，这可能导致低序列覆盖，特别是在富含半的区域。
　　因为HDX淬火条件(0°C和pH2.5)下的还原速度较慢, 传统上使用的化学还原剂(如TCEP)通常不能处理高二硫键结合的蛋白质。此外，这些药剂通常需要在高浓度下使用，这可能导致广泛的加合物形成和离子抑制.
　　在HDX兼容的条件下，电化学还原已经成功地用于还原重二硫键结合的蛋白，使序列覆盖其他难以达到的区域，并绕过不利的离子抑制ROXY HDX反应提供了高还原效率，改进的可重复性和稳健性，没有不必要的蛋白质氧化。

图2：Waters HDX-MS (Synapt G2Si)系统与ROXY联用的示意图，电化学流通池可以在0°C(1)下放置在HDX管理器内或在室温(2)下放置在室外。