乳汁体细胞计数法的操作步骤！

乳汁体细胞计数法的操作步骤！

百欧博伟生物：体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数（SCC），间接计数法就是后面提到的CMT法。

一、主要试剂和材料

美蓝染色液：美蓝乙醇饱和溶液30mL.（美蓝2g，95％乙醇100mL），10％氢氧化钠溶液0.1mL，蒸馏水100mL，将上列溶液混合摇匀，过滤后备用。二甲苯、95％乙醇。生物显微镜、载玻片、l0μL。微量加样器（或移液枪）等。

二、操作方法

⒈涂片制备

涂布：充分摇匀新鲜乳样，用l0μL微量加样器吸取中部乳汁l0μL，或用接种环蘸取等量的乳汁，将乳样滴于玻片一端中侧，仔细涂布成约lcm2。面积的乳膜（为便于操作，可在玻片下垫衬一张硬纸板，纸板上用毛笔划数个面积为lcm2的方格透视）。

干燥、脱脂、固定：涂好乳膜的玻片于37℃温箱中干燥，然后用二甲苯脱脂5min，再置95％乙醇中固定5～10min。

染色：玻片干燥后，用美蓝染色液染色5min。水洗，再用95％乙醇脱色数分钟，水洗干燥后镜检。

镜检及计数：在生物显微镜油镜下观察（用l0×目镜，其视野直径要求为0.016），计数100个视野内的细胞数，然后用下式计算：SCC=100xN／Лr2

视野面积Лr2=3.1416×（0.016／2）2。=0.0002cm2，

显微镜系数N=I／0.0002×100=500,000

SCC=系数×每个视野的细胞平均数（即细胞总数÷100）：细胞数／mL乳。

三、判定标准

随着和国内乳品行业的接轨，国内标准也在提高，一般以每毫升牛奶中含20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值（+）；超过该值为阳性，低于该值则正常。

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