冷冻切片技术的实验原理与方法！

冷冻切片技术的实验原理与方法！

一、实验目的

⒈掌握冷冻切片的方法

⒉掌握冷冻切片的用途

二、实验原理

冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。

⒈速冻 可减小冰晶直径，避免组织细胞损伤。

⒉制冷 压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷

三、实验材料

新鲜动物肝脏

四、实验方法

⒈准备 将仪器 打开，样品台温度调至-40 ℃。

⒉取材 组织必须新鲜，尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压，防止人为假象 。样品大小5X5X3mm。

⒊速冻 将样品放在样品台上，样品四周加水加固，冷冻5－10min.

⒋切片 升高温度至-15℃（视样品而定），约5min后开始切片，厚度6-15um。

⒌制片 将切片直接放在载波片上或先放在盛水（固定液）的培养皿中再转移到载波片上。

⒍染色观察 吸干水，加一滴苏木精，加盖玻片，用显微镜观察。

⒎记录 将观察的结果绘于实验报告上，整理自己用过的物品。

附：切片温度的设定

脑 -12℃

肝脏 -14℃

肾脏 -16℃

肌肉 -20℃

皮肤 -25℃

多脂肪组织 -30℃

经过固定的组织 -5℃ ～-10℃

附：快速制 片

1 固定 70％乙醇5～10min；

2 水洗 2min；

3 苏木精染色 5～10min；

4 脱色 0.1%HCl 至变红；

5 蓝化0.1NaOH 变蓝；

6 水洗 5～10s ；

7 脱水 70% 2min ；

8 伊红染色 5～10min ；

9 脱水 乙醇2minX2；

10 透明 二甲苯 3min；

11 封片 中性树胶封片。

冷冻切片机的基本操作：

⒈在使用前2小时开启电源，并将温度设定在-25℃;

⒉将适当大小和厚度的标本放在蘑菇状杯上，加上冷冻蜡，夹在切片机的固定槽内;

⒊准备好玻片，选择切片厚度，摇动手柄，即可做成切片;

⒋将做成的切片小心的吸附在玻璃片上;

⒌使用结束后关闭电源,清洁腔体和擦干水气, 做好使用记录。

⒍为让水蒸气蒸发，请不要马上关闭切片机的上盖移门，应到第二天再关。

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