沉降菌监测的操作方法与注意事项！

沉降菌监测的操作方法与注意事项！

一、方法

《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿中，经若干时间，在适宜的条件下使其繁殖到可见菌落并进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此评定洁净室（区）的洁净度。

二、沉降皿

沉降皿：直径90mm*15mm

培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）

       沙氏琼脂（SDA）

培养条件：同浮游菌监测

培养基质量：

 应符合2015年版《中国药典》中“（1921）药品微生物实验室质量管理指导原则”的相关要求。

1）培养基制备要求

2）培养基贮藏要求

3）培养基的质量控制试验

用于环境监控的培养基须特别防护，要双层包装和终端灭菌，如果不能采用终端灭菌的培养基，那么在使用前应进行的预培养以防止外来的污染物带到环境中及避免出现假阳性结果。

关键问题：暴露蒸发失水，会降低培养基的某些微生物的生长。

单向气流暴露4小时，TSA版失重16%

为了延长暴露和培养基的时间，同时确保平皿仍然提供可靠的结果，沉降皿可以浇注到一个特定的高浇注线。

包装：通常是双重或三重包装，这取决于洁净室的级别。外层包装进入下一个高级别的洁净室中之后被移除。对于*（ISO5级）洁净室和隔离器，三层透明包装时合适的。

隔离器的沉降皿：内层的包装材料必须是过氧化氢蒸汽不可渗透的，以确保这种常用的消毒剂不会转移的培养基上，采样后抑制微生物生长，使用为隔离器设计的培养基。

三、监测

1）人员的清洁、消毒和着装

2）在温度、湿度、压力的测试之后进行

3）明确测试状态，静态测试人员不得多于2人，一般应动态监测

4）开启净化空调系统

单向流、静态10min以上，非单向流30min以上

5）少采样点数

注：*（单向流）面积指送风口表面积；任何小的洁净区采样点不得少于2个。

6）采样位置：

离地面0.8-1.5m左右，高于工作面

关键设备或关键区域，可增加采样点

7）采样次数：每个点1次

8）采样时间：静态30分钟；动态4小时

单碟暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用对个沉降碟连续进行监测并累积计数。

9）少培养皿数：

四、注意事项

1）采取一切措施防止采样污染和其他人为对样本的污染。

2）采样注意事项：同悬浮粒子监测

3）培养基质量

4）阴性对照试验  每次或每个区域取1个对照培养皿

5）日常监测：*区及无菌隔离系统采样点数目应不小于3个且每个采样点的平皿数应不小于1个。

五、结果判断：

每个测点的沉降菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

在静态测试时，若某测点的沉降游菌的平均浓度超过评定标准，应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。

六、限度的理解：*＜1cfu/碟

举例：监测了左中右3个位置，1碟/位置

不合格结果：3个沉降碟平均菌落数≥1cfu

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