蛋白层析柱的填料方式介绍
时间:2022-04-21 阅读:81
蛋白层析柱使用减压洗脱,避免了加压洗脱时玻璃柱爆炸的危险。另外,柱子是用预定量的溶剂洗脱,把溶剂流干直至再加洗脱剂。这些特性,使得干法快速柱层析技术特别适合梯度洗脱。事实上,这也是开发此类层析柱的常选方式。顾名思义,梯度洗脱使用的使极性逐渐增加的溶剂洗脱。
需要的设备很简单,就是把减压抽滤所用的圆柱形多孔漏斗,通过一个锥形插口转换头连接到一个圆底烧瓶上,另外侧边的一个插口连接到水泵。要纯化的样品量决定了使用的漏斗的大小和洗脱液的接收体积。
蛋白层析柱干法装柱是在一个层析柱中直接加入硅胶,填充到你需要的高度,然后向其中加入石油醚,让溶剂*浸润硅胶,直至下端流出。在确保不会干的前提下,上面可以加压,让硅胶填充更紧密。
这样反复操作几次,完成装柱。湿法装柱是先将需要的硅胶加入到一个烧杯中,然后加入石油醚,搅拌除去硅胶中的气泡,然后将硅胶的悬浊液加入到层析柱中,加压让多余溶剂从下端流出,完成装柱。
干法装柱速度比较快,但不太容易装紧密,适合快速分离那些分离度较高或者只有一个点的样品。湿法装柱速度慢,但是柱子比较紧密,适合分离较难分的样品。而且湿法装柱可以预先在拌硅胶的时候加入三乙胺之类的,中和硅胶的微量酸性,对于分离那些硅胶中容易分解变杂的化合物很有效。