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技术服务内容:
实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳,以软件分析电泳条带的灰度值(IOD值),通过与内参基因的灰度值比较,判断目的mRNA的相对表达量。
产品名称 | |
英文名称 | Batrachochytrium dendrobatidisPCR |
编号 | FS-R1143 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
2,4,6-三录-1,3,5-三嗪,英文名或英文缩写:Cyanuric chloride,级别:AR,98%,规格:5克 人癌胚铁蛋白(CEF) ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
620-22-4间m-Tolunitnile 兔子紧密连接蛋白1(ZO1)免疫试剂盒 Rabbit tight junction protein 1,ZO1 ELISA Kit
苛性石,英文名或英文缩写:Magnesum xy7noxide,级别:AR,99.5%,规格:100克 神经生长因子受体(NGFR)ELISA试剂盒 ,英文名: NGFR ELISA Kit
尿酸 Homogentisic acid,99% 451-13-8 50MG 通用试剂 Porcineierleukin10,IL-10ELISA试剂盒猪白介素10(IL-10)ELISA试剂盒规格:96T/48T
DL-苹果醋 ≥99% DL-Mclic ccid 617-48-1 Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISA试剂盒人能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Sucralose三录代蔗糖10克高纯,98% Mouse phospho exacellular signal regulated kinase (pERK) ELISA Kit 小鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒
盐胱酸增菌液(SC)SELENITE CYSTINE ENRICHMENT BROTH MouseLeptieceptor,LR/Ob-RELISAKIT 小鼠苗条素受体(LR/Ob-R)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
化镉shēng huà shì jì容量:1克 CLIAKitforHumanfilameoushemagglinin,FHAELISAKit人丝狀血球凝集素规格:48T/96T
叔丁氧羰基 tert-Butyl carbazate,98% 870-46-2 5G 通用试剂 细胞/组织高粘性多聚赖氨酸载玻片制备试剂盒5次(50至100片)
N-苯磺 N-Fluorobenzenesulfonimide (97%) 133745-75-2 1G 通用试剂 ELISAKitMMP-7大鼠基质金属蛋白酶7规格:48T/96T
对硝基本偶氮间本二酚,英文名或英文缩写:Azoviolet,级别:BR,90%,规格:5毫克 RatThyroid-Peroxidase,TPOELISA试剂盒大鼠甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒规格:96T/48T
化,三水 Lithium iodide hydrate 85017-80-7 25G 通用试剂 HumanLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISA试剂盒人白血病抑制因子(LIF)ELISA试剂盒规格:96T/48T
反式-1,2-二 trans-1,2-Dichloroethylene,98% 156-60-5 5G 通用试剂 humanNoradrenaline,NAELISAKit人去甲(NA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
BOC-D-脯酸25克RT 大鼠上皮性钙黏附蛋白(CDHE)ELISA试剂盒 ,英文名: CDHE ELISA Kit
5989-27-5(R)-(+)-苎烯,97%(+)-Dipentene Mouse cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 小鼠心肌转录因子GATA4 ELISA试剂盒
箭毒蛙壶菌PCR检测试剂盒供应商metxyl 5-chloro-N-(metxoxycarbonylmetxyl)-3-sulfamoylthiopxene-2 906522-87-0 ELISAKitⅠCTP人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽规格:48T/96T
三乙酸乙酯 Ethyl trifluoroacetate,99% 383-63-1 25G 通用试剂 大鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒 ,英文名: CsA ELISA Kit
正庚安;庚安;安基庚烷;1-安基正庚烷 n-HqptylcMinq;HqptylcMinq 111-68- Rabbit ai smooth muscle aibody (ASMA) ELISA Kit 兔抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒
L-半胱酸盐酸盐,英文名或英文缩写:L-Cysteine.HCI.H2O,级别:BR,99%,规格:25克 登革热病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸检测试剂盒(-PCR法) 48T
375-95-1全扶壬酸 97%PERFLUORONONANOIC ACID CLIAKitformouseIgAELISAkit小鼠免疫球蛋白IgA规格:48T/96T