人T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa进口试剂盒

人T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa进口试剂盒

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2021-02-25 13:16:25
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产品简介

人T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa进口试剂盒检测种属:大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、等动植物。

详细介绍

备试剂与收集血样:
1.  收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20    -70    )保存,避免反复冻融。
2.  标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 设标准 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 中吸出 500ul 弃去。第八 为空白对照。
3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4.  洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

产品名称

T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa进口试剂盒

英文名称

Activation of human T cell junction proteins (LAT) ELISA Kit

货号

BJ-G10109

规格:96T/48T
特点:灵敏性高、特异性强、重复性好
用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断
运输:快递(根据客户要求,选择具体的运输方式)
试剂盒种属:羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等

检测程序:
1.  加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 120 分钟。
2.  洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 6 0 分钟。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 3 0 分钟。
样本实验前准备:
ELISA进口试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。
5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBSPH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBSPH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60恒温烤箱中至少烤 1 hr
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯),每次10 min
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 2×2min
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到 98~100)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 2×2minTBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B37湿盒孵育 30 min
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37湿盒孵育 2 hr 4过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B37湿盒孵育 10 min
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37湿盒中孵育30 min
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 2037湿盒孵育封闭 20 min
12. HRP-SA 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E150~200,终浓度 5~20 nM),37湿盒中孵育 30 min
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。 
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