细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

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商品属性：

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 VEGF121b / VEGF-A 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 SCN2B 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 ILT6 / LILRA3 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人

RS1 (大鼠皮肤成纤维样细胞)50T 登革热病毒Ⅰ型PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

1瓶 15P-1株 15P-1 低温运输和保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Apelin-13

100次 链霉菌 PCR Mix 6（RPB2） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

哥伦比亚CNA琼脂基础 Columbia CNA Agar Base 250gm-TEC琼脂进口、国产m-TEC Agar用于水中耐热细菌滤膜计数(Acumedia方法)250

50次 柱式真菌RNAout Column Fungal RNAOUT 4℃保存 78-5000 pg/mL 人桥粒芯糖蛋白2(DSG2)ELISA试剂盒

液体菌种保存管（副溶）（不含瓷珠）  1.4ml*50支 0.312-20 ng/mL 人可溶性血管内皮蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒

SCDLP液体培养基 Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth 250g 78-5000 pg/mL 人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒

1瓶 PA12株 PA12 低温运输和保存

解磷细菌培养基 Norganic Phosphorus Bacteria 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Suppressor of cytokine signaling 1

100次 古细菌+真细菌种属鉴定 PCR Mix 3（rDNA） Bacterial DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人粘附分子3(Cell adhesion molecule 3)ELISA试剂盒

l mg Z-VAD-FMK（Caspase Inhibitor） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存Campy-Cefex 琼脂基础进口、国产Campy-Cefex Agar Base用于弯曲杆菌分离培养(FDA方法)250