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培养操作步骤 ：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
商品属性：
产品名称 | 规格 | 货号 |
1×10⁶cells/T25培养瓶 | BJ-X96589 |
商品介绍：
名称 D283 Med (脑髓母细胞瘤细胞) 别称D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 种属人类 年龄（性别）男性，6岁 组织来源小脑 生长特性半贴壁半悬浮 细胞形态上皮细胞样 背景描述D283 Med细胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。 生物安全等级1 生长培养基MEM＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~ 52 小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO?，5% 温度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.) Yes, in soft agar 基因表达情况The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) |
实验要点及说明：
1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；
2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造，并经过铬酸洗液处理；
3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；
4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；
5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
人 TNFA 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带Myc标签
人 PPP2CA 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
人 IL6 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
小鼠 IL2RB / CD122 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带HA标签
小鼠 IL2RB / CD122 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
小鼠 ERBB2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 HHIP 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带His标签
人 HHIP 基因全长ORF
D283 Med (脑髓母细胞瘤细胞)2 ug pYr-1.1-hU6-EGFP（可包装腺病毒） pYr-1.1-hU6-EGFP（可包装腺病毒） 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人前列腺雄激素调节粘蛋白样蛋白1 (PARM-1)ELISA试剂盒
1 管 TH1大肠杆菌 TH1 E.coli Strain -80℃保存 0.312-20 ng/mL 人基质金属蛋白4(MMP-4)ELISA试剂盒
50次 柱式昆虫DNAout Column Insect DNAOUT 常温 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Prolactin-inducible protein
250mL Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) Veronal Buffered Saline with EDTA (VBSE) 常温保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Protein S100-A11
5g Chloramphenicol 室温保存 78-5000 pg/mL 人背板同源蛋白ELISA试剂盒
1g CHAPS CHAPS 室温保存 31.2-2000 pg/mL 人胸腺基质淋巴生成素(Thymic stromal lymphopoietin)ELISA试剂盒
24T 总巯基测试盒/总脂测试盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存DME培养基进口、国产DMEM10升高糖，含丙酮酸钠和胺
50mL Q交换介质 Q Medium 常温干燥封袋保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Sestrin-1
125mL Triton Lysis Buffer,2X Triton Lysis Buffer,2X 常温保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Vascular cell adhesion protein 1
10次 一站式检测TUNEL试剂盒（DAB法） One-Stop Biotin-Based TUNEL Kit -20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Transmembrane protease serine 4
2216E琼脂 2216E Agar 250gx
