UNG (Uracil N-Glycosylase)

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商品介绍：

niao嘧啶 DNA 糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名 Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 来源于 E. coliuracil N-glycosylase 基因的重组表达，分子量为 26kDa。其可催化含niao嘧啶的单链和双链 DNA 释放游离niao嘧啶。
它对 RNA 无活性，主要应用于 PCR 扩增产物的防污染。
它的作用原理基于：如果在 PCR 反应中以 dUTP 替代dTTP掺入DNA 中，形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增产物，该酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 基的糖苷键，降解该 PCR 扩增产物。

活性定义：在标准 PCR 反应体系下，37℃条件下，1 小时降解 1μg 含 dU 碱基的单链 DNA 的酶量为 1 活性单位。
反应 Buffer：UNG与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的，但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
酶储存液：20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50%Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
储存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反复冻融。
热失活：95°C，5min。
操作方法
1.配制反应体系
Super Taq DNA Polymerase 0.5 μl
dNTP/dUTP Mixture 2~4 μl
10XHi PCR Buffer 5 μl
Uracil N-Glycosylase (5U/μl) 0.2~0.5 μl
Primers (10μM each ) 1 μl
Template DNA 10 ng-1 μg
DEPC-treated Water up to 50 μl
2. PCR 扩增循环参数
循环数 温度 时间
去污染 50°C 2min
热失活 95°C 5min
30-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
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