NAD苹果酸酶测试盒50管/48样
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2022-04-13 16:26:18
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NAD苹果酸酶测试盒50管/48样

紫外分光光度法

50管/48样

BJ-01S9549

商品介绍:

测定意义:

ME广泛存在于微生物、培养细胞、动物和植物胞浆中,尤其在植物组织中活性较高。ME催化苹果酸氧化脱羧的可逆反应,产生丙酮酸和CO2,以及伴随NAD(P)+的还原反应,是苹果酸代谢的关键酶。ME活性与生物合成和抗氧化密切相关。近年来植物ME活性测定较多,已经成为抗氧化研究的热点。根据辅酶专一性和对底物特异性的不同,可将ME分为NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

测定原理:

NAD-ME催化NAD+还原成NADH,在340nm下测定NADH增加速率。

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

QQ截图20220307153443.png 

注意事项:

①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。

②使用干净的塑料容器配置洗涤液。

③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。

⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。

⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。

⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。

⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用

样品制备:

1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。

2). 过滤混浊溶液。

3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。

4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。

5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。

6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。

7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。

8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。

9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。

10).含脂肪的样品用热水提取。

HS2ST1 基因全长ORF克隆

PGRMC1 基因全长ORF克隆

AICDA 基因全长ORF克隆

YKT6 基因全长ORF克隆

RGS1 基因全长ORF克隆

NCALD 基因全长ORF克隆

NCS1 基因全长ORF克隆

DCTN6 基因全长ORF克隆

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DGKE 基因全长ORF克隆

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操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 


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