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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96768 |
商品属性:
名称 T/G HA-VSMC (血管平滑肌细胞) 别称T/G HA VSMC; T/G HA-vSMC; T/GHA-VSMC; TGHAVSMC 年龄(性别)11月龄 组织来源血管平滑肌 生长特性贴壁细胞 细胞形态成纤维细胞样 生物安全等级1 生长培养基Ham's F-12K+0.05mg/ml VitC+0.01mg/ml Insulin+0.01mg/ml Transferrin+10 ng/ml Sodium Selenite+0.03mg/ml ECGs+10% FBS+10mM HEPES+10mM TES+1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
食蟹猴 ALK-1 / ACVRL1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
食蟹猴 EphA4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 ART4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 ICOS / AILIM / CD278 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 Frizzled-4 / FZD4 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
大鼠 IL12B / IL-12B 人细胞裂解液 (阳性
T/G HA-VSMC (血管平滑肌细胞)100mL 水饱和 Water-Saturated Phenol 常温避光保存 7.8-500 pg/mL 埃博拉病毒(EBOV)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
100mg 盐酸万 Vancomycin Hydrochloride -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人α半乳糖苷(α-GAL)ELISA试剂盒
EC肉汤(含小倒管) EC Broth 10ml*20支/包
20次 裂殖酵母化学感受态制备试剂盒(无高效转化液) S. pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit 常温 0.78-50 mIU/mL ELISA Kit for Human Glucose-6-phosphate 1-dehydrogenase
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)颗粒 Potato Dextrose Agar 300ml/袋*10 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Interferon alpha-inducible protein 6
1套 PCR优化试剂盒 PCR Optimization Kit -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Dual specificity protein phosphatase 5
1%亚碲酸钾溶液 5ml*10 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Gastricsin
50T 牛瘟病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人含Patatin磷脂域包含蛋白2(PNPL2)ELISA试剂盒
2 ug pIκB-EGFP pIκB-EGFP 低温运输,-20℃保存 0.47-30 nmol/L ELISA Kit for Human Lysyl oxidase homolog 3
2mL dGTP溶液,2.5mM dGTP Solution -20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒
2 ug pDsRed-Monomer pDsRed-Monomer 低温运输,-20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人CXC趋化因子受体4(CXCR4)ELISA试剂盒
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。