《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法》国家标准征求意见
- 2021/10/12 14:04:54 22975
- 来源：仪表网
【仪表网 仪表标准】根据国家标准化管理委员会国家标准制修订计划，由中国标准化研究院提出并归口的《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法》(计划号：20205075-T-424)国家标准现已形成征求意见稿，按照《国家标准管理办法》的有关规定，现向社会各界公开征求意见。
抗氧化是抗衰老、抗疲劳、抗炎等生物活性的重要基础。绝大部分以植物提取物为原料的功能食品都含有大量抗氧化活物质，例如芦丁、槲皮素、花青素、茶多酚等。目前，我国生产具有抗氧化功能产品(药品、食品和保健品等)的规模以上企业多达2000多家，已经形成了2300多亿元的产业规模。这些产品的原料大部分来自农业废弃物。
目前，植物提取物中抗氧化活性评价方法主要根据受试对象分为体内和体外二大类。体内方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等为指标，测定其含量来评价体内抗氧化活性的高低。体外抗氧化评价体系则以自由基清除法、氧化还原法为主。但必须注意的是，这种抗氧化评价方法有一个固有的缺点：检测选择性差。更确切地说，当样品中含有两种或者两种以上的抗氧化活性物质的时候，分析结果无法区分每一种物质的抗氧化活性高低。而基于实验动物模型的抗氧化评价方法时间长、成本高且误差大，因此难以形成国家标准。
薄层色谱是近年来广泛应用到植物提取物分析的一项色谱分离技术。建立在薄层色谱和 DPPH 显色反应联用基础上的抗氧化分析方法兼备选择性高和通用性好的优点。更重要的是，薄层色谱是目前唯一能与生化反应直接联用的色谱工具。
目前可查询到的关于薄层色谱技术的国家标准有两项：《配合饲料中 T-2毒素的测定 薄层色谱法》和《蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法 薄层色谱法》。未查到将薄层色谱与生物传感联合用于植物提取物中功效成分活性评估的国家标准、行业标准和地方标准。这一缺失，使得企业在利用植物废弃物作为原料生产抗氧化功效产品及其质量控制缺乏技术支撑，无标准可用。
因此，有必要尽快制定《植物提取物抗氧化活性评价 薄层色谱法》国家标准，以满足相关企业生产和品控的需要。
本标准规定了薄层色谱联用 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)显色反应评估植物提取物抗氧化能力的方法(以槐米提取物为例，芦丁为标准)。
本标准的主体内容包括：范围、规范性引用文件、原理、试剂、仪器和设备、测定步骤、空白试验、结果计算与表示、精密度和回收率、检出限、检验报告等。
方法原理：
用硅胶薄层色谱对槐米提取物的甲醇溶液进行展开，实现对其中多种抗氧化物质的色谱分离，然后通过浸渍的方式将停留在硅胶薄层上的分离结果与 DPPH 显色反应相耦合，显色反应结果用光密度扫描仪定量检测，检测结果以芦丁为内标加权定量计算评估槐米样品综合抗氧化能力。
仪器与设备：
1.实验室常用玻璃器皿。2.分析天平：灵敏度0.0001g。3.涡旋混匀器。4.超声清洗仪：超声频率 40～80 kHz。5.离心机：转速≥4000 rpm。6.双光束紫外-可见光分光光度计：检测范围 190-900 nm。7.薄层色谱工作站，包括：薄层点样仪、薄层展开仪、自动浸渍器、光密度扫描仪。
检测限和定量限：
使用合适浓度的芦丁标准溶液，逐渐减少点样量，进行薄层色谱-DPPH 显色反应，根据光密度扫描结果计算峰高与基线噪音高的比，S/N=3(S 为对照品峰高，N 为基线噪音高)时的对照品浓度为检出限(LOD)，得到芦丁的检测限12ng/斑点，S/N=10 时的浓度为定量限(LOQ)，得到芦丁的定量限39ng/斑点。
精密度和准确度：
通过测定槐米提取物中芦丁的添加回收率(分别进行了 3 个添加水平试验，50，100，150 mg/g，每个添加水平重复 3 次)对优化得到的分离-检测方法的精确度和准确度进行验证。表 1 所示，方法的添加回收率为 82%-97%，精密度RSD<10%。这表明本标准所使用的提取方法和分离检测手段具有良好的准确度和精密度。
本标准适用于同时评价植物性食品原料中多元抗氧化物质的抗氧化能力。
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