《低温乳制品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR方法》征求意见
- 2022/9/30 11:29:47 29290
- 来源：仪表网
【仪表网 仪表标准】《低温乳制品中金黄色葡萄球菌检验 实时荧光PCR方法》团体标准已完成征求意见稿的编制，根据《团体标准管理规定》的要求，为保证标准的科学性、严谨性和可操作性，现在《全国团体标准信息平台》面向社会各界公开征求意见。
本文件按照GB/T 1.1的编写规则起草。参考GB 4789.1 食品安全国家标准 食品微生物检验总则；GB 4789.10 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验；GB 4789.28 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求；GB 19489 实验室生物安全通用要求；GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检验等规程编制。
本文件规定了巴氏杀菌乳、高温杀菌乳(低温保存)、发酵乳、调制乳等低温乳制品中金黄色葡萄 球菌的实时荧光 PCR 检测法(商品化试剂盒方法)。本文件适用于巴氏杀菌乳、高温杀菌乳(低温保存)、发酵乳、调制乳等低温乳制品中金黄色葡萄 球菌的快速初筛及鉴定。
仪器和设备：
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备如下: 恒温培养箱:36 ℃±1 ℃；电子天平:感量 0.1 g；均质器(旋刀或拍击式)或等效设备；pH 计或精密 pH 试纸:精密度 0.1；微量移液器及无菌带滤芯吸头；金属浴:98 ℃ ± 1 ℃；掌式离心机；实时荧光定量 PCR 仪；低温冰箱。
样品制备及增菌培养：
将样品平衡至室温，无菌操作称取25 g(mL)样品，置于盛有225 mL 7.5%氯化钠肉汤的无菌均质 袋或其他无菌容器中，若样品是固态或半固态，用拍击式均质器拍打1 min ~2 min混匀(或用旋转式均 质器8000 rpm ~10000 rpm均质1 min ~2 min)；若样品是液态，不需要均质，震荡混匀即可。如使用均 质袋，可直接进行培养；如使用均质杯或其他容器，无菌操作将样品转移到其他培养容器。
结果判定；
质控系统：空白对照和阴性对照均未出现典型的扩增曲线或Ct值≥40，阳性对照出现典型的扩增曲 线并且Ct值<30，且上述对照HEX通道出现典型的扩增曲线并且Ct值<40，则检测系统正常。否则，任 一种对照出现非上述正常结果，应重做实验，同时排除污染。
检测系统正常的情况下，检测样品Ct值≤35时，判定PCR结果为阳性；当35<检测样品Ct值<40时， 重复检测一次，如果Ct值<40并且曲线有明显的对数增长期，判定PCR结果为阳性，否则判定PCR结果 为阴性；当Ct值≥40或无Ct值时，判定PCR结果为阴性。
如果PCR结果为阴性，且HEX通道扩增曲线正常，则直接报告阴性结果；如果PCR结果为阴性，且 HEX通道扩增曲线Ct值≥40，则直接报告本次检测无效；如果PCR结果为阳性，则需要根据7.4进行确证实验。
结果与报告：
根据PCR检测结果及确证实验结果，报告25g(mL)样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
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