纺织品MALDI-TOF-MS法征求意见
- 2022/9/22 10:06:10 29820
- 来源：仪表网
【仪表网 仪表标准】国家标准计划《纺织品 某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析 第2部分：还原蛋白质多肽分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法》于近日编制完成并公开征求意见，时间截止到11月12日。主要起草单位为上海海关、中纺标检验认证股份有限公司、上海爱丽纺织技术检验有限公司等。
蛋白的分子量比较大，需要温和地将角蛋白溶解下来，经过一定的分离，找到物种差异存在的蛋白区域,才能使用仪器对存在物种差异的多肽片段进行检测。ISO 20418: 2018提供了三种器仪分析蛋白质序列的检测方法，其中 ISO20418-2:2018《纺织品某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析第2部分:还原蛋白质多肽分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法》，是一种利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对动物纤维进行有效的定性定量检测方法。
我国是羊绒生产大国，全球市场75%的羊绒产自中国，出口创汇可观。可常常由于缺乏客观统一的标准，导致出口和进口国的检测数据不一致，引起各类贸易争端。根据WTO原则，我们应广泛采用国际标准来制定我国的相应标准，以避免给实验室结果的互认、国际间检验技术交流带来一些不利的影响。
因此修改采用国际标准ISO 20418-2:2018来制定相应的国家标准《纺织品某些动物毛纤维蛋白质组定性和定量分析第2部分:还原蛋白质多肽分析基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)法》。
本文件规定了采用MALDI-TOF-MS方法测定纺织品中特种动物纤维混合物组分的定性定量方法。非动物纤维组分可根据GB/T2910系列标准所描述的方法进行检测。再将两部分的结果结合起来确定整体纤维含量。
本方法基于显微镜观察混合纤维的外观形态进行初步的鉴定，参照FZ/T01057系列标准。本方法不适用于同物种的动物纤维同时出现的状况(如山羊绒和马海毛的混合物)，此类样品可通过镜检法分析定量(比如ISO17751系列)。
原理是使用SDS/二硫苏糖醇(DTT)/磷酸缓冲液提取动物毛发中的蛋白。提取的蛋白经SDS-PAGE纯化，再经胰蛋白酶对凝胶中的蛋白进行酶解。使用MALDI-TOF-MS对物种特异的蛋白比例进行分析。对照标准曲线计算出混合物中各动物纤维的含量。
仪器和器具有：
1、球磨仪，用于将织物或纤维制成极细的粉末。
2、 金属浴：用于控制温度+30℃-+100℃。
3、旋涡振荡器：用于均匀混合液体。
4、小型蛋白电泳装置。
5、割胶器或刀片3)：将含有目标蛋白的凝胶切割出来。200μL的吸头，将吸头尖切去2cm可以作为凝胶圆点割胶器。
6、微量移液器：0 ~20μL(±0.20μL)、20μL~200μL(±1.60μL)、200μL~1000μL(±8μL)。
7、吸头，吸头尖端带有层析介质，可用于浓缩纯化样品。
8、MALDI-TOF质谱仪，用于多肽的分子量检测。
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