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公司向您推荐PrimaCell™成人皮肤成纤维细胞试剂盒规格的详细说明:
产品名称 | PrimaCell™成人皮肤成纤维细胞试剂盒规格 |
规格 | 6次/盒 |
货号 | YS-X6673 |
细胞株的培养和传代培养:
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10%小牛血清和抗生素的培养液中,培养对细胞因子有依赖性的细胞株时还有加入适量细胞因子。在37℃ 5% CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养,根据细胞生长特性,在适当的时候进行传代,一般3~4 天传代一次。
悬浮生长细胞的传代:
直接离心后吸去培养上清液,用新鲜培养液稀释悬浮细胞,一般按1:2-1:5 稀释细胞后,分瓶继续培养。
实验操作步骤:
a.采用认可的方案处死人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞啮齿动物。
b.立即在无菌超净台内用70%乙醇擦洗整个动物。
c.用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用无菌镊子将皮肤扯向后腿。
d.用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部,取出含有胚胎的子宫,置于无菌的培养皿上。
e.剔除胚胎周围的包膜,将胚胎放于无菌的含有无菌PBS的100ml烧杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。继续用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮为止。
实验材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培养液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml灭菌烧杯2个; 人皮肤成纤维细胞,CCC-HSF-1细胞
3、50ml离心筒2个
4、灭菌培养皿1个,细胞培养瓶1个
5、1ml ,200μl移液器各1支;枪头盒2个;无菌玻璃搅拌棒1个
6、细胞计数板1块;
7、灭好菌的镊子1把,剪刀1把;
8、酒精灯1台;
Linsmaier & Skoog基础培养基 进口/国产 规格:500毫升溶/片剂
细胞超氧化物阴离子荧光法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
冰冻切片组织CDK4蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次
通用抗体稀释溶 进口/国产 规格:10/100毫升
冰冻切片a-淀粉酶染色试剂盒 进口/国产 规格:50次
石蜡切片组织TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次
果菜抗坏血酸比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
组织半胱氨酸蛋白酶-7(PASE-7)活性荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
细胞CDK2蛋白表达比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:10/50 次
RPE蛋白标记试剂盒(不含RPE) 进口/国产 规格:3次(1毫克/次)
植物谷胱甘肽(GLUTATHIONE)总浓度荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:50次
动物组织钠/钾ATP酶(Na+/K+ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
PrimaCell™成人皮肤成纤维细胞试剂盒规格尼美舒利 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
奥昔布宁 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
奥扎格雷 UV法含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
格拉司琼 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
昂丹司琼 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
普罗布考 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
苄氨酸 UV法含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
特比萘芬 UV法含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
鞣酸小檗碱 TLC法鉴别 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
美沙拉嗪 UV法释放 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
多沙唑嗪 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 1mg
昔萘酸沙美特罗 含量测定 进口/国产 常温,避光 规格: 50mg
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,货号16000-044),15%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。