参数规格：
产品名称：巴西诺卡菌检测试剂盒（荧光PCR法）
产品货号：YS-P013820

产品规格：50T

产品分类：PCR检测试剂盒

产品运输：低温运输

产品保存：-20℃保存

产品有效期：一年

产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。

实验过程：

一、试剂准备

1. DNA模板

2．公司产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步骤

1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。

3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

特点优势：

1.   特异性：所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析，经过TIANDZ及自建庞大数据库的比对，确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段，可实现对细菌种属及血清型的特异检测，特异性均达到100%。

2.   重现性：该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证，重现性为100%。

3.   灵敏性：该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测，当样品中细菌的浓度达到103cfu/ml时，可实现对其的直接检测，无需繁琐的增菌过程。

4.   实用性：检测范围广，涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌，可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测，整个检测过程为3-4个小时。

5.   优势1：序列资源丰富，除TIANDZ公布的序列外，公司还进行了大量菌株的序列破译，从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性。

6.   优势2：该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证，凭借公司拥有的丰富的菌种资源，每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证，确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。

兔可溶性肿瘤坏死因子-1(sTNF-1)螺[1,3,3-吲哚-(8'-氧并二氢吡喃)][光致变色化合物](>98.0%(T))ras癌因家族Rab3A--Rab3D抗体

兔抗状腺过氧化物酶抗体(TPO-Ab)  1,3,3-吲哚-β-萘二[光致变色化合物](>98.0%(T))鸟嘌呤核苷酸交换因子rasgef1a抗体

兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40) 1,3,3-吲哚-奈谔(>98.0%(HPLC)(T))胰腺癌转移相关蛋白RLLM1抗体

兔铜蓝蛋白(CP)1,1'-双(2,4-二)-4,4'-二氯化联吡啶(>97.0%(HPLC))环指蛋白45/自分泌运动因子受体抗体

兔黑色素瘤相关抗原(MAGE)1,1'-二-4,4'-联吡啶鎓盐二氯化物水合物(>98.0%(HPLC)(T))维酸相关孤儿受体α抗体

兔弹性蛋白酶3B(ELA3B)  1,1'-二庚-4,4'-二溴化联吡啶鎓(>98.0%(HPLC)(T))维酸相关孤儿受体γ抗体

兔生长分化因子7(GDF7)1,1'-二正辛-4,4'-联二溴化吡啶嗡(>98.0%(T))癌因RAS相关蛋白Rab4A抗体

兔甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP2)1,1'-二苄-4,4'-联吡啶鎓盐二氯化物水合物(>98.0%(HPLC))ATP调节离子通道ROM K抗体

兔质金属蛋白酶8(MMP-8)1,1'-二-4,4'-二氯化联吡啶鎓(>97.0%(HPLC)(T))ras因相关蛋白Rab24抗体

兔组织蛋白酶L(CTSL)  1,1'-二-4,4'-二氯化联吡啶鎓(>98.0%(HPLC)(T))视黄脱氢酶10抗体

兔质金属蛋白酶11(MMP-11)3,3-二-3H-萘并[2,1-b]吡喃(>98.0%(HPLC))Ras蛋白脑组织同源类似物RHEB蛋白抗体

兔接头蛋白2(ELMO2)2,5-降二烯(含稳定剂BHT)(>97.0%(GC))原癌因相关蛋白RAP2B抗体

兔缩酶(ALD) 硫靛红视网膜母瘤结合蛋白5抗体

兔碳酸酐酶VI(CA6)酸胆固酯(>96.0%(GC))Rho相关蛋白激酶2抗体

兔硫氧化还原蛋白(Trx)亚油酸胆固酯(>95.0%(T))核糖核苷酸还原酶亚R2抗体

兔磷脂爬行酶1(PLSCR1)棕榈酸胆固酯(>97.0%(T))Runx3抗体
巴西诺卡菌检测试剂盒（荧光PCR法）PFK2/PFKFB3 /FITC  荧光素标记6磷酸果糖激酶2抗体IgG钨 99.99% metals basis

Phospho-PFK2 (Ser466) /FITC  荧光素标记磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体IgG1,1,2-三氯烷 standard for GC, ≥99.8% (GC)

KLF2/FITC   荧光素标记兔抗人、大、小鼠肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白2抗体IgG四氧硅烷 98%

Klf4/FITC  荧光素标记肠道内富含的Kruppel样因子/上皮锌指蛋白K抗体IgG硅钨酸 AR

KLF5/FITC  荧光素标记肠道内富含的Kruppel样因子5抗体IgG1,2,4- Standard for GC，≥99.5% (GC)

KLF6/FITC  荧光素标记转染抑癌因KLF6抗体IgG硫代米氏酮 AR

KLF8/FITC  荧光素标记KLF样转录因子8抗体IgG邻二 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

KLF9/FITC  荧光素标记转录因子KLF9抗体IgG维多利亚蓝B 高纯级，80%
使用方法：

一、样品采集：

1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照菌检验要求进行。

2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。

3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。

4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。

一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液（最好用带芯枪头，下同）。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用

6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。