恶性多发性畸胎瘤细胞;NTERA-2培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
6.快速固定步骤需谨慎操作,以避免细胞形态的改变或抗原的损失。将取出的盖玻片置于含有4%多聚甲醛的固定液中,室温下固定10-15分钟。固定时间不宜过长,以防细胞结构过度硬化。
7.固定完成后,用PBS(磷酸盐缓冲液)漂洗盖玻片3次,每次5分钟,以去除残留的固定液。此步骤对于后续的免疫染色至关重要,能有效减少背景噪音。
8.接下来进行通透化处理,使用0.1% Triton X-100溶液处理盖玻片10分钟,使细胞膜通透性增加,便于抗体进入细胞内与抗原结合。
9.通透后,再次用PBS漂洗3次,随后进行封闭处理,用含5%胎牛血清的PBS封闭液覆盖盖玻片,室温孵育30分钟,以减少非特异性抗体结合。
10.最后,根据实验需求选择合适的特异性抗体进行免疫染色,并按照抗体说明书推荐的步骤进行孵育、洗涤、显色等操作,直至完成整个免疫细胞化学检测流程。通过显微镜观察染色结果,分析恶性多发性畸胎瘤细胞NTERA-2的形态学特征及相关蛋白表达情况。