一、分光光度法测定物质含量时应注意的事项:
1、是显色反应的条件
2、是测量吸光度的条件。显色反应的条件有：显色剂的用量 、显色时间、干扰物质的消除方法、介质的酸度、显色时溶液的温度等。测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。
紫外分光光度计法测定微量铁的显色剂可以选择邻二氮菲(phen)在pH=2～9的条件下，Fe2+离子与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物，反应如下：
此络合物lgK稳=21.3，摩尔吸光系数。
显色前，要用盐酸羟胺把Fe3+离子还原为Fe2+离子：
测定时应控制溶液酸度在pH=5左右为宜，酸度太高，反应进行较慢，酸度太低，Fe2+离子水解，影响显色。
二、试剂和仪器
仪器：UV-1500PC（上海美析仪器有限公司）
试剂 ：1、100铁标准溶液
2. 10铁标准溶液由100稀释制得
3.盐酸羟胺10%溶液
4.邻二氮菲溶液0.15%
5.NaAc溶液1mol/L
三、 实验步骤
1、测量波长的选择
在50ml容量瓶中按次序准确加入以下溶液，10铁标准溶液5ml，10%盐酸羟胺1ml，摇匀，再加入1mol/LNaAc溶液5ml，0.15%邻二氮菲3ml。用水稀释至刻度。在分光光度计上，用1cm比色皿以水为参比溶液，测定其在440～580nm之间的吸光度。并绘制图，从曲线上找出大吸收的波长。
2、显色剂用量的选择
取7个50ml容量瓶，各加入1ml10铁标准溶液，1ml盐酸羟胺，摇匀。再分别加入0.10、0.30、0.50、0.80、1.0、2.0、4.0ml邻二氮菲和5mlNaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀，放置10min。以水为参比溶液，在选择的波长下测定各溶液的吸光度。并绘制,从曲线上找出显色及的适宜用量V。
3、显色时间的选择
在1个50ml容量瓶中，加入1ml10铁标准溶液，1ml盐酸羟胺，再加入由上述选择的适宜邻二氮菲Vml，5mlNaAc，以水稀释至刻度，摇匀。立刻用比色皿以水为参比在选择的波长下测量吸光度。然后依次测定放置5、10、30、60min后的吸光度。绘制图，选出与邻二氮菲显色反应所需的适宜时间。
4.标准曲线的绘制
在6个50ml容量瓶中，分别加入0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml 10铁标准溶液，再分别加入1ml盐酸羟胺，2ml邻二氮菲，5mlNaAc溶液，用水稀释至刻度，摇匀。以水为参比溶液在选择的波长 、选择的适宜显色剂用量、适宜显色时间下测定各溶液的吸光度。绘制标准曲线图。
数据记录与处理
1.测量波长的选择
由上图知，适宜波长为=510nm
2.显色剂用量的选择
显色剂体积V/mL
由上图知，适宜指示剂用量为V=1.0ml
3.显色时间的选择
由上述图知，直线斜率K=1.0×10-4≈0，故可认为显色时间对吸光度几乎无影响。
4.标准曲线的绘制
铁标准溶液体积v/mL
六、关于我们
上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高薪技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出*的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。
美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的蕞薪实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。
美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。
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