兔子Ⅱ型胶原elisa检测试剂盒标本的采集及保存：
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释5,000倍。
兔子Ⅱ型胶原elisa检测试剂盒操作步骤：
1.待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
2.酶标板置4℃，包被过夜。
3.洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4.阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
5.酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
6.洗板，同（4）。
7.每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8.酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
9.洗板，同（4）。
10.每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
11.每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
12.分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13.数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
