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知道这些,ELISA实验就简单了

来源: 上海沪鼎生物科技有限公司

2019/3/19 9:27:36 1417

为了得到更好的实验结果,一些ELISA试剂盒实验新手们还需多加了解技术内容,公司每周都会为您精心整理出重点技术要领,能够熟练的掌握好这些之后再应用到实验里面就会简单的多。今天的主要内容是入了ELISA的门,这些技术点你得知道。

样本加样方法

1、细胞上清:前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释。

2、脑脊液:前处理必须是细胞离心去除,每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时,用标准品稀释液直接稀释。

3、血清血浆:请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。

A.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

B.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。

C.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂;

D.标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

E.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确。

4、组织匀浆液的样本,要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂,防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解,造成检测结果的值偏低。

因组织匀浆液的样本蛋白种类多,含量丰富,实验参照血清血浆标本的处理方法进行,否则就会影响实验结果。具体是加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本,需稀释时,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。

因为目标蛋白不同,可能造成降解的蛋白类型可能不一样,如果实验前通过文献确定用哪种蛋白酶抑制剂,有针对性加入,可节省抑制剂。如果查不到相关文献,可采用组合抑制的办法确保蛋白不易被降解。

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