如果你在真核系统上开展生物学研究,那么你有很大的机会要培养细胞。作为实验的原材料,细胞的状态很重要。不过,如今的实验室中有无数的细胞系,每一种都有其*的生长特性,研究人员如何才能确定细胞培养物是健康的?
各大厂商已开发出一系列工具来监控细胞培养物。一些是专门的检测,来监控药物筛选等应用中的细胞变化。当然,更多的是用于日常的细胞培养。在此,我们就来看看你有哪些选择。
流式检测
细胞健康并没有一个定义。MilliporeSigma流式细胞应用的研发主管Kamala Tyagarajan认为,这个词涵盖了细胞的一切,包括细胞密度、倍增时间以及氧化应激和凋亡状态。不过,zui直接的指标是细胞活力。
之前,细胞活力是利用*和台盼蓝来评估的。台盼蓝是一种无法透过细胞膜的染料,这意味着它会被健康细胞排斥,而只能进入细胞膜受损的细胞。研究人员将染料与细胞混合,并移液至*,在获得细胞计数的同时评估多少是活的。这个过程可以自动化,比如Bio-Rad的TC20自动细胞计数器。不过,你也可以选择放弃台盼蓝,而转投流式细胞仪的怀抱。
比如,MilliporeSigma的Muse® Count & Viability Assay就使用了两种荧光染料的混合物,一种可染色所有有核的细胞,另一种则染色无活力的细胞。通过在Muse细胞分析仪上分析染色的细胞,研究人员可获得样品中的细胞总数和活细胞数量。
据Tyagarajan介绍,MilliporeSigma为Muse细胞分析仪开发了超过25种检测,其中有10种可评估细胞健康,同时还为其他流式细胞仪(如Guava easyCyte系统)开发了其他检测。这些检测可监控凋亡、氧化应激、线粒体健康以及细胞周期状态。
Bio-Rad的CytoTrack™检测也是基于流式细胞仪,可监控细胞增殖。该公司细胞生物学的产品Chris Linnevers表示,CytoTrack根据特定染料的丰度来提供细胞增殖的量度。在CytoTrack检测中,染料被上样到细胞中,随着细胞的分裂,每个细胞中的染料数量降至一半。通过流式细胞仪的分析,研究人员可计算细胞分裂了多少次。
成像检测
许多公司,包括Bio-Rad、Essen Bioscience和GE Healthcare,也开发出成像平台,能够捕获形态变化,从而监控细胞培养物。
比如,Bio-Rad的ZOE™荧光细胞成像仪是一个台式手动显微镜,将平板电脑那样的界面与倒置显微镜和数字荧光成像能力融为一体。ZOE具有一个明视场和三个荧光通道,“是常规监控细胞健康的好工具,特别是表达荧光蛋白的细胞”。即便如此,研究人员也可使用该公司的VivaFix™试剂,这种染料可与伯胺结合,利用活细胞和死细胞之间的染色强度来区分它们。
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