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大鼠高香草酸elisa试剂盒操作步骤:

来源: 上海研生实业有限公司

2024/11/22 16:57:37 13

大鼠高香草酸elisa试剂盒操作步骤:

1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟。

2. 分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准 品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。 注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

3. 加样:依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水;其余微孔中加入 50ul 的待测样本。

4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。

5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。

6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 15-30s,充分清洗酶标板 5 次,用吸水纸*拍干。 7. 显色:各孔加入显色剂 A 液 50ul 后,再加入显色剂 B 液 50ul。

8. 终止:25-37℃下避光反应 10-15 分钟,加入 50ul 终止液。

9. 读板:在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。 注:读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹,读板时间控制在终止反应后的 30 分钟内,以免影响准确性。

数据计算

1. 绘制标准曲线:各标准品 OD 值减去底色即减去空白孔 OD 值,以 6 个标准 品的 OD 值为纵坐标 y,以标准品的浓度为横坐标 x,绘制曲线图,如图示, 并计算出回归方程 y=ax+b。

2. 将待测样品的 OD 值代入方程式,计算各组样品浓度,再乘以稀释倍数,即 为样品的实际 ABP 浓度。

3. 敏感度:1.0 pg/ml


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