噻呋酰胺又叫噻氟菌胺(thifluzamide),属于噻唑酰胺类杀菌剂,具有强内吸传导性和长持效性｡它是含噻唑环的苯基酰胺化合物,可防治多种作物病害,广泛应用于水稻､麦类､花生､棉花､甜菜､咖啡､马铃薯､草坪等多种作物m｡目前尚不能査询到噻呋酰胺在花生作物中的残留*(maximumresiduelimit,MRL)值,我国GB2763-2016规定噻呋酰胺在稻谷中的MRL值为7mg/kg,在糙米中的MRL值为3mg/kg,马铃薯为2mg/kg,日本肯定列表规定噻呋酰胺在糙米中的MRL值为1mg/kg,马铃薯为0.05mg/kg｡膳食风险评估时,花生及花生油均归类为植物油进行评估,日膳食量按0.0327kg计算｡目前国内外关于噻呋酰胺的检测方法多种多样,使用较多的是气相色谱法和髙效液相色谱法其检测方法容易受到杂质干扰,选择性差,近年来,灵敏度高､选择性强的高效液相色谱质谱联用技术被用于噻呋酰胺的残留检测,但其检测方式多是以负离子扫描模式为主,在实际的农残分析时存在一定的局限性,灵敏度通常不如正离子扫描模式髙｡本研究经过对前处理过程和仪器的调节优化,建立了在电喷雾正离子模式下,采用超髙效液相色谱-串联质谱联用仪(ultraperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometer,UPLC-MS/MS)多反应监测(multiplereactionmonitoring,MRM)模式,检测噻咲酰胺在花生中的残留的分析方法｡样品经乙腈提取,QuEChERS方法净化,采用基质匹配外标法定量测定,以期为膳食风险评估工作打下基础｡
WatersHclass超高效液相色谱(美国Waters公司);UPLC/XevoTQ-S三重四极杆质谱仪(配电喷雾离子源,美国Waters公司);CK2000高通量组织研磨仪(托摩根生物科技有限公司);Laborota4000eficient旋转蒸发仪(德国Heidolph公司);Milli-Q超纯水仪(美国Millipore公司);QL-901旋涡混合器(江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司)｡乙腈(分析纯,天津市康科德科技有限公司);乙腈､甲酸(色谱纯,美国Fisher公司);无水*(MgS04,天津市风船化学试剂科技有限公司);N-丙基乙二胺(primarysecondaryamine,PSA)､石墨炭黑(graphitecarbonblack,GCB)(上海安谱公司)｡240g/L噻呋酰胺悬浮剂和噻呋酰胺农药标准品(纯度&96.0%,合肥星宇化学有限责任公司)｡分别称取标准品各5.00mg于50mL棕色容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成浓度为100Hg/mL的标准储备液,于4°C条件下保存｡分别吸取上述标准储备液各0.5mL于50mL容量瓶,用乙腈定容至刻度,制成浓度为1jxg/mL的混合标准工作液｡
240g/L噻呋酰胺悬浮剂,设2个施药剂量:低剂量为150ga.i./ha,高剂量为225ga.i./ha｡各设1次､2次施药,施药间隔期7d,每处理设3次重复｡用随机法采集距末次施药后14､21､28d的花生植株､土壤､花生壳和花生仁样品｡另设清水空白对照,处理间设保护隔离带｡
准确称取样品(土壤､植株､花生仁､花生壳)5.0g于50mL具塞离心管中,加入20mL乙腈,5mL水,浸泡10min,用组织研磨仪振荡提取15min后,向其中加人3g氣化钠,再振荡提取丨5min,于离心机上以4000r/min离心5min,量取10mL上清液,浓缩至干,用乙腈定容至2.5mL,待净化｡2.3.2净化将待净化液转移至10mL离心管(预先加人200mg无水MgS04､70mgPSA和15mgGCB)中,涡旋振荡2min,4000r/min离心5min,取上清液过0.22nm滤膜于2mL进样小瓶,待测｡
相色谱条件feift:AcquityUPLCHSST3(100mmx2.1mm,1.8nm);流动相:A相:乙腈;B相:0.1%甲酸水溶液,乙腈+0.1%甲?7jC(90:10,F:F);进样量??1nL;柱温■_30｡<2;流速:0.2mL/min;运行时间:3min｡
电离模式:电喷雾正离子ESI(+);毛细管电压:1.5kV;离子源温度:150°C;脱溶剂气温度:500°C;脱溶剂气流量:1000L/h;锥孔反吹气流量:150L/h;锥孔反吹压力:7bar;检测方式:多反应监测扫描模式(multiplereactionmonitoring,MRM);质谱采集参数见表1
啤?呋酰胺在花生中的膳食暴露风险评估分别由公式(1)､(2)计算得出｡国家估算每日摄人量(nationalestimatesofdailyintake,NEDI):NEDl(mg>=2(STMRixEixPixFi)((riskquotient,RQ):RQ=NEDl/(ADI><bw)(2)式中:Fi=0.0327,为我国一般人群对花生的日摄入量,kg;STMRi为规范残留试验中值,mg/kg;Ei和Pi分别为食品的4ft部分因子和食品加丨:因子,本文中不考虑区别,均设1;ADI为每II允许摄人M,引用我闽闽家相关标准的规定,mg/kgbw;bw为体重,kg,我国人均体S—般按63kg汁､RQ>1时,表示存在不可接受的风险,数值越大,风险越大;RQ<I时,表示风险为可接受,数值越小,风险越小
芩虑到嗯呋酰胺在乙腈溶液中有较强的溶解性和其在pH值为5￣9时稳定,试验尝试了乙腈-甲酸水溶液流动相体系的多种配比关系,以调节目标物峰形｡最终发现,在流动相屮加人少量甲酸,甲酸的浓度以0.1%为宜,且当流动相流速为0.20mL/min,流动相配比为乙腈+0.1%甲酸水(90:10,时,冃标化合物的出峰时间和峰形均能达到理想效果试验对比了气相色谱电子捕获检测器(H-ECD)和超高效液相色谱-串联质谱联用仪(UPLC/MS/MS)对试验样品的影响｡结果发现,检测器的选择对花生仁样品的检测效果有较大的影响｡由图1￣2可以看出,在同一添加浓度,同一前处理条件[气相检测时,用正己烷+丙酮(95:5,K:F)定容]下,用气相色谱电子捕获检测器分析,目标物附近有很大的杂质干扰,即使通过冷藏分离过滤,分析效果依然较差,而当使用UPLC/MS/MS,检测器的*选择性能直接去除基质干扰,而且目标物峰形尖锐､对称｡因而本实验选择用UPLC/MS/MS作为最终检测手段｡
试验根据噻呋酰胺理化性质及样品基质特点,采用乙腈提取,QuECHERS方法净化,超高效液相色谱-串联质谱法测定,建立了噻呋酰胺在花生样品中简便､快速､高灵敏度的电喷雾正离子检测方法｡噻呋酰胺在花生中各基质样品3个添加浓度水平下的回收率在75.5%和107.9%之间,相对标准偏差不大于1〇%｡膳食风险评估结果表明,240g/L噻呋酰胺悬浮剂,150￣225ga.i/ha在花生上用药1?欠,采收间隔期14､21､28d,风险商为0.0013,使用安全｡该方法测定结果重现性好,准确度､灵敏度和精密度均符合农药残留分析要求,可用于花生各基质样品中噻呋酰胺残留t的测定,亦可为其他样品中噻呋酰胺残留A的测定提供参考｡
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