与核酸纯化相比,蛋白纯化可是一项相当艰苦的工作。纯化时间长,操作步骤繁琐。有时,在实验室呆了一整天,换来的却是让人伤心的结果,蛋白得率低,纯度差。这时你也许会想,如果纯化蛋白像提质粒一样简单就好了。
如今,你的梦想成真了。Clontech(Takara旗下)推出了新一代的蛋白纯化试剂盒 – His-Tagged Purification Miniprep Kit。真的就像质粒纯化一样,加样、结合、清洗、溶出,几次离心,5分钟即可纯化出100 μg His-tag融合蛋白。
这个系统在纯化柱中安装了尼龙膜,能够在室温下快速操作,无需等待,并且与哺乳动物和细菌的细胞兼容。细胞裂解液中通常有各种添加剂存在,比如β-巯基乙醇、EDTA、DTT、甘油等,没关系,这个系统也能稳定发挥高性能。
纯化柱中的尼龙膜经过改良,膜的表面积大,能产生高纯度、浓缩的蛋白质。通过这种技术,尼龙膜的蛋白结合能力可媲美树脂,甚至更强。与树脂相比,膜的滴下速度快,可在短时间内进行纯化。柱床体积小,可进行少量、高浓度的溶出。
从2-5 ml培养液中制备出200-800 μl细胞裂解液,加入纯化柱后经过平衡、结合、洗涤和溶出,5分钟即可完成纯化,zui多获得100 μg His-tag融合蛋白。浓度大约在0.3-1 mg/ml。操作流程简便,时间短,可降低蛋白质降解或活性损失的风险,让下游应用的成功率更高。
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