高效液相色谱仪是利用混合物各组分在固定相和流动相中溶解、分配或吸附等化学作用性能的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。液相色谱仪在食品分析、环境分析、生命科学、医学检验和无机分析等领域得到广泛使用。一般来说，80%～85% 的有机物原则上可采用液相色谱仪分析。
 

　　高效液相色谱仪是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。现如今，液相色谱法应用非常广泛，像是高沸点不易挥发的、受热不稳定的有机化合物都可以用液相色谱仪来测定，比气相色谱的局限性小很多。流动相就像是一条延绵不断的河流，从储液瓶出发，经过脱气机，混合比例阀再到色谱柱，检测器，最后流到了废液桶。如果它不纯净或被污染的话，那整个液相都会波及到。下面小编就带大家一块来学习一下使用流动相时的注意事项吧。
 

　　一、流动相试剂的选择：
 

　　1.色谱纯。液相色谱仪所用的试剂必须是色谱纯级别的，而且使用之前需要抽滤经过0.45um或者0.22um的微孔滤膜，除去试剂中的细小颗粒和其他杂质，以免溶剂残留的杂质在色谱柱长期累积，降低柱效和寿命。
 

　　2.粘度。一般要求流动相的粘度应小于2cp，若使用高粘度溶剂，势必会增高柱压，不利于分离。常用的低粘度溶剂有乙腈、丙酮、乙醇等。
 

　　3.溶解性。溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性，符合相似相溶的原则，以免样品沉淀在系统中特别是色谱柱中，日积月累降低柱效。
 

　　4.溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用的检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。截止波长是指某一个特定的波长,超过这个波长的紫外线,紫外检测器对其几乎不响应,或者说响应很小。对于示差检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，来达到好的灵敏度。
 

　　5.缓冲盐和PH。用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，来抑制样品目标物的解离，增加目标物在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。一般样品溶液是酸性时，会在流动相中加入少量甲酸，醋酸或者磷酸来提高液相的分离度和改善峰形，但一定注意流动相的PH在色谱柱的耐受酸碱度范围内。样品溶液是碱性时则相反。可以根据目标物的pKa来确定pH，根据pH选择缓冲盐的种类，常用的缓冲盐溶液有乙酸铵，磷酸盐，三乙胺等。
 

　　二、流动相的储存：
 

　　1.流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。和waters液相配套的一般都是玻璃瓶。
 

　　2.流动相的存放时间一般不超过24h，现配现用是安全的，特别是缓冲盐溶液，如乙酸盐等，极容易产生沉淀和滋生微生物长霉。长期积累的微生物会出现肉眼可见的絮状“毛毛”粘附在溶剂滤头上，损坏滤头，然后进入真空腔和比例阀甚至是色谱柱中，最终损坏一连串的仪器配件和耗材。因此缓冲盐的流动相最好是现配现用，抽滤脱气(一般是超声波脱气)，不要贮存，使用完后仔细刷洗储液瓶，然后准备下一次的使用。
 

　　3.储液瓶一定要盖严，最好用原装配套的盖子，一是防止溶剂，特别是有机溶剂的挥发引起组分变化，导致保留时间的改变，二是防止二氧化碳溶入流动相中，影响流动相的PH值。